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原文传递基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针、制备方法及其应用

专利名称：	基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针、制备方法及其应用
摘要：	本发明公开了基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，包括以下步骤：(1)取脱铁铁蛋白加入水中，调pH至酸性使脱铁铁蛋白解聚；(2)将上述步骤(1)的溶液震荡均匀后逐滴加入由pH敏感和pH不敏感的两种染料组成的混合液，继续震荡一段时间，调节溶液pH至中性使脱铁铁蛋白重新聚合；(3)将上述步骤(2)的混合液室温震荡后过滤，取滤液，超滤离心后收集截留液，即得含有基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的溶液，4℃保存备用。本发明通过将pH敏感和pH不敏感的两种染料经简便的一步混合同时封装到脱铁铁蛋白内部空腔，构建了用于检测细胞内pH值的比率型荧光纳米探针，该探针具有制备简便、稳定性好，抗干扰能力强，细胞毒性低、生物相容性好的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	郑州大学
发明人：	何磊良;冯娇迪;吴拥军;熊亚敏;丁丽华;玉崧成;于斐;王佳;吴予明
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910575736.4
公开号：	CN110208236A
代理机构：	郑州先风知识产权代理有限公司
代理人：	黄伟
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新技术开发区科学大道100号
主权项：	1.基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取脱铁铁蛋白加入水中，调pH至酸性使脱铁铁蛋白解聚； (2)将上述步骤(1)的溶液震荡均匀后逐滴加入由pH敏感和pH不敏感的两种染料组成的混合液，继续震荡一段时间，调节溶液pH至中性使脱铁铁蛋白重新聚合； (3)将上述步骤(2)的混合液室温震荡后过滤，取滤液，超滤离心后收集截留液，即得含有基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的溶液，4℃保存备用。 2.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(1)中取置换保存液为水的浓度为1×10-4mol/L脱铁铁蛋白加入水中溶解备用，脱铁铁蛋白的终浓度为5×10-7mol/L。 3.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(1)中添加0.1mol/L HCl调pH至酸性。 4.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(2)中pH敏感染料为荧光素，pH不敏感染料为罗丹明B，总终浓度为5×10-4mol/L，荧光素和罗丹明B的摩尔比例为1-9:9-1。 5.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(2)中震荡10min后加入染料混合液，再继续震荡20min后调节pH至中性。 6.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(2)中加入0.1mol/LNaOH调节溶液至中性。 7.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(3)中将混合液在室温震荡2h，采用0.2μm的过滤膜除去聚沉物，用水清洗滤膜后收集滤液。 8.根据权利要求1所述基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，其特征在于，上述步骤(3)中将滤液于30KDa超滤管，6000g，4min，离心4次。 9.基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针，其特征在于，由权利要求1至8任一项所述方法制备得到。 10.基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的应用，其特征在于，将其用于检测细胞内pH的变化。
所属类别：	发明专利