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原文传递传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用

专利名称：	传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用
摘要：	本发明提供了一种传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒及应用。本发明技术具有自由组合、高通量、高速度、低成本、准确性高、重复性好、灵敏度高、线性范围广、无需洗涤、操作简便的优点。在临床诊断中引进液态芯片技术和产品，将极大地提高检测效率和降低检测成本。在本发明平台上能够实现高通量、高速度、低成本、准确性高、重复性好地进行人sAg浓度的测定，同时能够将HIV、HCV和TP的三种进行定性实验。本发明相对于传统的免疫测定法，旨在提供高通量、快速、准确的可同时检测多种传染病抗原抗体的技术平台和试剂盒。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京协和洛克生物技术有限责任公司
发明人：	吴建榕;娄金丽;辛愿
专利状态：	有效
申请日期：	2018-03-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201810218467.1
公开号：	CN110275022A
代理机构：	北京市英智伟诚知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘丹妮
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100176 北京市大兴区经济技术开发区科创14街11号院2号楼
主权项：	1.一种传染病筛查及乙肝表面抗原定量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被有抗原抗体的亲和素磁微球，磁微球封闭液、标准品稀释液、抗原抗体藻红蛋白标记物、抗原抗体标记生物素、鞘液、丙型肝炎病毒抗体、艾滋病毒抗体、艾滋病毒P24抗原、梅毒螺旋体抗体的阳性对照和乙肝表面抗原质控品。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微球为表面带有荧光色的聚苯乙烯磁微球，所述每个微球含有210-6～510-5g的表面抗原、HIVP24单克隆抗体和亲和素。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液，是在pH 7.0-7.4、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、1-10％氯化钠、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微球封闭液，是在pH7.0-7.4、浓度为10-100mM Tris-HCl缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.1-0.5％生物素、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述样本缓冲液是在10-100mM的磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。 6.根据权利要求3至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为曲达通X-100、吐温20、布里杰-35、吐温40、吐温60、吐温80、十二烷基磺酸钠、斯盘20、烷基酚聚氧乙烯4醚、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000，优选为吐温20；所述防腐剂选自以下一种或多种：Proclin 300、叠氮钠、硫柳汞、硫酸庆大霉素，优选为Proclin 300；所述的蛋白保护剂选自以下一种或多种：牛血清白蛋白、牛γ蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖，优选为牛血清白蛋白。 7.根据权利要求1至6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述藻红蛋白标记抗原抗体使用长臂偶联剂；优选地，所述长臂偶联剂选自以下一种或多种：sulfo-LC-SPDP、SMCC、Sulfo-SIAB、Sulfo-SMPB；优选地，所述连接抗体长臂偶联剂为SMCC，连接抗原长臂偶联剂为sulfo-LC-SPDP。 8.根据权利要求1至6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗原抗体使用长臂生物素；优选地，所述长臂生物素为sulfo-LC-Biotin。 9.权利要求1至7中任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤，不分前后顺序：包被有抗sAg和P24单克隆抗体的微球的制备：将未包被的微球中加入磷酸二氢钠缓冲液、N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液和碳二亚胺溶液进行活化，然后加入抗sAg和抗P24的单克隆抗体1-125μg在4-8℃进行包被；洗涤二次；再加入含1-10％质量分数的动物血清蛋白的封闭液进行封闭；最后在10-100mM磷酸盐缓冲液中避光、4-8℃存放； sAg梯度浓度标准品和sAg质控品的制备：先在PH 7.0-7.4、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成标准品稀释液；再将大肠杆菌表达的重组sAg与标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成标示浓度为0-5000ng/ml的梯度浓度标准品以及80-300ng/ml的sAg质控品；生物素标记HIV、TP和HCV抗原：将HIV、TP和HCV抗原与生物素按照摩尔比1:10混合，再通过纯化得到生物素标记的HIV、TP和HCV抗原；羊抗sAg和P24单克隆抗体偶联藻红蛋白：0.5mg的羊抗sAg和P24单克隆抗体，加入SMCC试剂液，使得SMCC试剂与羊抗sAg和P24单克隆抗体的摩尔比为40，使得SMCC试剂与藻红蛋白的摩尔比为80，常温反应60min，向藻红蛋白加入二硫苏糖醇(DTT)使得其终浓度为25mM，常温反应30min，将活化的藻红蛋白和羊抗sAg和P24单克隆抗体按照摩尔比1:1混合透析16-20小时，得到羊抗sAg和P24单克隆抗体偶联藻红蛋白复合物； HIV、TP和HCV抗原偶联藻红蛋白：0.5mg的HIV、TP和HCV抗原，加入SPDP试剂液，使得SPDP试剂与HIV、TP和HCV抗原的摩尔比为40，使得SPDP试剂与藻红蛋白的摩尔比为80，常温反应60min，向藻红蛋白加入二硫苏糖醇(DTT)使得其终浓度为25mM，常温反应30min，将活化的藻红蛋白和HIV、TP和HCV抗原按照摩尔比1:1混合透析16-20小时，得到HIV、TP和HCV抗原偶联藻红蛋白复合物；样本缓冲液的制备：在10-100mM磷酸盐缓冲液中，加入1-10％质量分数的蛋白保护剂，0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。 10.按照权利要求1至7中任一项所述的试剂盒在制备用于临床监测或诊断与乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒相关的疾病的产品中的应用。
所属类别：	发明专利