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原文传递一种鉴定结直肠癌症生物标记物的方法及其检测试剂盒

专利名称：	一种鉴定结直肠癌症生物标记物的方法及其检测试剂盒
摘要：	本发明提供了一种鉴定结直肠癌的生物标记物的方法及其检测试剂盒。所述生物标记物为血清中经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。本发明检测方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血便可区分正常人和结直肠癌患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速定量结直肠癌患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖，对于研究血清游离甘露糖及葡萄糖与结直肠癌之间的关系、寻找新型结直肠癌临床检测标志物有着非常重要的意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛大学附属医院
发明人：	张丽娟;黄晓丹;田字彬;邢晓明;王雪玲
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201811324001.6
公开号：	CN110261495A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	266555 山东省青岛市市南区江苏路16号
主权项：	1.用于鉴定结直肠癌的生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血清经过柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。 2.根据权利要求1所述的用于鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤： (1)调节pH为7-14：取待检测的血清样品加超纯水于EP管中，加入氢氧化钠，涡旋混匀； (2)PMP衍生：每个样品加入PMP，涡旋混匀，离心后置于烘箱反应； (3)加酸中和反应：将烘箱内的样品取出，放置冷却，每个样品加入盐酸，涡旋混匀； (4)萃取：每管加入有机溶剂，涡旋，离心，移除下层有机溶剂，保留上清； (5)将样品离心，取上清液于装有内插管的棕色上样瓶中，盖紧盖子，离心，待用于高效液相分析； (6)绘制甘露糖和葡萄糖的标准曲线； (7)将步骤(5)得到的色谱图与步骤(6)的标准曲线比对并分析计算，确定甘露糖、葡萄糖的浓度以及葡萄糖与甘露糖浓度的比值。 3.根据权利要求2所述的用于鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱为Agilent 1260高效液相系统，Agilent Poroshell EC-C18色谱柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步骤(5)中的色谱条件为：检测波长：254nm，带宽4nm；参比波长：350nm，带宽100nm；柱温：37℃；流速：1mL/min；进样体积：20μL；流动相：A相为乙腈，B相为pH为5.5的0.1mol/L乙酸铵-乙酸缓冲溶液。 4.根据权利要求3所述的用于鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(5)中流动相的梯度变化为： 0min，A相15％，B相85％； 10min，A相22％，B相78％； 15min，A相24％，B相76％； 15.1min，A相15％，B相85％； 20min，A相15％，B相85％。 5.根据权利要求2所述的用于鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(3)中盐酸的浓度为0.3mol/L。 6.根据权利要求2所述的用于鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：所述步骤(4)中有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷中的至少一种。 7.权利要求2-6所述的鉴定结直肠癌的生物标记物的定量分析方法在结直肠癌疾病中的应用，其特征在于所述血清样品为结直肠癌患者的血清。 8.一种鉴定结直肠癌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1所述的生物标记物，即血清经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。 9.根据权利要求8所述的鉴定结直肠癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括浓度为4163μmol/L的葡萄糖的标准液(直肠癌)。所述试剂盒中包括浓度为81.09μmol/L的甘露糖的标准液和浓度为3885的葡萄糖标准液(结肠癌)。 10.权利要求2-9任一项所述的试剂耗材在制备用于结直肠癌患者血清中甘露糖和葡萄糖定量的试剂盒中的用途。 11.一种鉴定结直肠癌的试剂盒，其特征在于通过血清中的甘露糖和葡萄糖定量鉴定结直肠癌。 12.权利要求8-11任一项所述的鉴定结直肠癌的试剂盒在体外检测结直肠癌的用途。 13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于通过血清中的甘露糖和葡萄糖定量鉴定结直肠癌。
所属类别：	发明专利