详情

原文传递一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的制备方法与应用

专利名称：	一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的制备方法与应用
摘要：	本发明提供了一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原‑聚乙烯亚胺结合物的制备方法与应用。本发明利用b‑PEI特殊的多氨基结构，通过羧基和氨基的交联，将半抗原和二茂铁电化学探针同时固定在b‑PEI上，制备出二茂铁标记的半抗原‑聚乙烯亚胺结合物((hapten)3‑bPEI‑(Fc)5)，并将这种聚合物用在免疫传感器上并制备免疫传感器，可用于农药蝇毒磷的分子识别免疫传感器。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州钰芯传感科技有限公司
发明人：	奚亚男;胡淑锦
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910453172.7
公开号：	CN110261451A
代理机构：	佛山帮专知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	颜德昊
分类号：	G01N27/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	510000 广东省广州市南沙区丰泽东路106号(自编1号楼)X1301-B5841
主权项：	1.一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的制备方法，其特征在于，所述二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物((hapten)3-bPEI-(Fc)5)的分子结构式为： 2.一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的制备方法，其特征在于，所述二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物利用分支型聚乙烯亚胺(b-PEI)同时交联免疫半抗原和探针分子二茂铁的原理制备得到。 3.根据权利要求1或2所述的一种针对农药蝇毒磷分子识别的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的制备方法，其特征在于，该制备方法的具体步骤如下： S1：取15.0mg半抗原溶解于1000μL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后分别加入17.2mgN，N-二环己基碳酰亚胺(DCC)及9.6mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)，常温下避光搅拌4h，离心后将上清液加入到4g/L的b-PEI的甲醇溶液中搅拌过夜，得到混合液A液； S2：取13.6mg二茂铁乙酸溶解于500μL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后分别加入17.3mg N，N-二环己基碳酰亚胺(DCC)和9.6mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)，常温下避光搅拌4h，离心后将上清液加入到2.5mL混合液A液中，避光搅拌4h，得到新的混合液B液； S3：将混合液A液和混合液B液干燥后分别溶于4mL超纯水中，离心除去不溶物，所得溶液在1L超纯水中常温透析64h，获得半抗原-聚乙烯亚胺结合物和二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物。 4.如权利要求3所述的半抗原，其特征在于，所述半抗原的分子结构式为： 5.如权利要求3所述方法制备的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的应用，其特征在于，所述二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物可用于免疫传感器上并制备免疫传感器。 6.根据权利要求5所述的二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物的应用，其特征在于，所述二茂铁标记的半抗原-聚乙烯亚胺结合物，以ITO电极或金电极为基底电极并修饰多克隆抗体，可用于检测农药蝇毒磷的电化学免疫传感器。 7.如权利要求6所述的ITO电极修饰方法，其特征在于，该制备方法的具体步骤如下： S1：取已制备好的ITO电极，依次在丙酮，无水乙醇，纯水中超声清洗2min，室温晾干备用； S2：将预处理后的ITO电极置于含50mmol/L邻氨基苯甲酸(o-ABA)的1mol/L硫酸溶液中，在0V～1.0V内利用循环伏安法反复扫描20圈，扫描速率为100mV/s，所得电极用PBS溶液清洗2次以除去附在电极表面的硫酸溶液，得到聚合o-ABA修饰ITO电极； S3：在工作电极上滴加100μL EDC/NHS溶液(1mg/100μL)，活化10min，抽去反应后的EDC/NHS溶液后，再向修饰电极表面滴加50μL多克隆抗体(10μg/mL，反应20min。抽去反应后的抗体溶液，用含0.05％Tween20的PBS溶液清洗电极三次，每次60μL。所得电极用1mol/L乙醇胺溶液(pH8.5)封板30min后再用PBS溶液清洗三次，得到ITO修饰电极。 8.如权利要求6所述的金电极修饰方法，其特征在于，该制备方法的具体步骤如下： S1：取已制备好的金电极，在新鲜配制的Piranha溶液中(V浓硫酸∶V双氧水＝3∶1)浸泡10min，用超纯水淋洗干净后，分别在0.30及0.05μm氧化铝粉中抛光至镜面并分别用无水乙醇，纯水各超声波处理1min，浸泡在1mol/L硫酸溶液中，在0.2～1.6V电压下循环扫描20圈，然后将所得电极置于1mmol/L11-巯基十一酸和6-巯基己醇混合溶液(体积比为1∶1)中自组装过夜，得到SAMs(11-巯基十一酸和6-巯基己醇混合自组装膜)修饰金电极。 S2：将SAMs修饰金电极分别用乙醇和超纯水清洗1分钟以除去不稳定吸附的巯醇分子，随后电极在100μL EDC/NHS溶液(1mg/100μL)中活化10min。抽去反应的EDC/NHS溶液后，电极置于50μL 10μg/mL的多克隆抗体PBS溶液中反应20min，抽去反应后的抗体溶液，电极用含0.05％Tween20的PBS溶液清洗三次，每次60μL，所得电极用1mol/L乙醇胺溶液(pH8.5)封板30min后再用PBS溶液清洗三次，得到自组装膜修饰金电极。
所属类别：	发明专利