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原文传递羰基化蛋白质的鉴定

专利名称：	羰基化蛋白质的鉴定
摘要：	本发明涉及化学蛋白质组领域。具体而言，涉及羰基化蛋白质的鉴定。更具体而言，涉及通过苯胺衍生的探针富集、鉴定和/或检测羰基化蛋白质的方法和组合物。更具体地，本发明涉及细胞铁死亡中羰基化蛋白质的富集、鉴定和/或检测，这些羰基化蛋白质可能作为铁死亡相关疾病的标志物或治疗靶标。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京大学
发明人：	王初;陈影
专利状态：	有效
申请日期：	2018-03-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201810200763.9
公开号：	CN110261521A
代理机构：	北京永新同创知识产权代理有限公司
代理人：	栾星明;王子楠
分类号：	G01N30/08(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100871 北京市海淀区成府路202号北京大学化学与分子工程学院B241室
主权项：	1.一种用于富集生物学样品中羰基化的蛋白质的方法，所述方法包括： a)从所述生物学样品提取蛋白质； b)在NaBH3CN存在下，使所提取的蛋白质与带有可检测标记物的苯胺探针接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述苯胺探针标记；和 c)通过所述苯胺探针上的可检测标记物富集羰基化的蛋白质。 2.一种用于鉴定和/或检测生物学样品中羰基化的蛋白质和/或其羰基化氨基酸残基的方法，所述方法包括： a)从所述生物学样品提取蛋白质； b)在NaBH3CN存在下，使所提取的蛋白质与带有可检测标记物的苯胺探针接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述苯胺探针标记；和 c)通过所述可检测标记物检测羰基化的蛋白质，或通过所述可检测标记物富集羰基化的蛋白质用于基于质谱的测定。 3.一种用于富集生物学样品中羰基化的蛋白质的方法，所述方法包括： a)从所述生物学样品提取蛋白质； b)在NaBH3CN存在下，使所提取的蛋白质与带有端炔的苯胺探针接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述苯胺探针标记； c)在允许发生叠氮-炔环加成反应的条件下，使步骤b)的产物与可检测标记物的叠氮化物接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述可检测标记物标记；和 d)通过所述可检测标记物富集羰基化的蛋白质。 4.一种用于鉴定和/或检测生物学样品中羰基化的蛋白质和/或其羰基化氨基酸残基的方法，所述方法包括： a)从所述生物学样品提取蛋白质； b)在NaBH3CN存在下，使所提取的蛋白质与带有端炔的苯胺探针接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述苯胺探针标记； c)在允许发生叠氮-炔环加成反应的条件下，使步骤b)的产物与可检测标记物的叠氮化物接触，使得羰基化的蛋白质中羰基化的氨基酸残基被所述可检测标记物标记；和 d)通过所述可检测标记物检测羰基化的蛋白质，或通过所述可检测标记物富集羰基化的蛋白质用于基于质谱的测定。 5.权利要求1-4中任一项的方法，其中步骤b)在大约pH5至大约pH7下进行，优选在酸性pH下进行，例如pH5至pH6。 6.权利要求1-4中任一项的方法，其中步骤b)所述苯胺探针的浓度为至少大约0.5mM。 7.权利要求3或4的方法，其中所述带有端炔的苯胺探针选自邻-氨基苯乙炔(o-APA)、间-氨基苯乙炔(m-APA)和对-氨基苯乙炔(p-APA)。 8.权利要求2或4的方法，其中通过LC-MS/MS进行所述基于质谱的测定。 9.权利要求1-4中任一项的方法，所述可检测标记物是可裂解的生物素标签。 10.权利要求9的方法，其中所述可裂解的生物素标签是下式所示的偶氮苯生物素标签(Azo tag)：或优选地，是下式所示的酸裂解生物素标签(Acid tag)： 11.苯胺探针在富集、鉴定和/或检测生物学样品中羰基化的蛋白质中的用途，所述苯胺探针选自邻-氨基苯乙炔(o-APA)、间-氨基苯乙炔(m-APA)和对-氨基苯乙炔(p-APA)，优选m-APA。 12.一种用于富集、鉴定和/或检测生物学样品中羰基化的蛋白质的试剂盒，所述试剂盒至少包括选自邻-氨基苯乙炔(o-APA)、间-氨基苯乙炔(m-APA)和对-氨基苯乙炔(p-APA)，优选m-APA的苯胺探针。
所属类别：	发明专利