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原文传递一种生物分子的质谱检测方法

专利名称：	一种生物分子的质谱检测方法
摘要：	本发明提供一种生物分子的质谱检测方法，所述质谱检测方法包括以下步骤：先将待测样品进行数据非依赖性质谱采集，得到质谱数据；然后对质谱数据进行处理，得到检测结果；所述数据非依赖性质谱采集的循环扫描模式包括一级全扫描和数据非依赖性二级扫描，所述数据非依赖性二级扫描的碎裂模式为源内碰撞诱导解离和高能碰撞解离的混合碎裂。本发明提供的质谱检测方法中的混合碎裂模式显著提高了母离子的二次碎裂效率，得到更为丰富的碎片信息和更完善的二级谱，用于生物分子检测、尤其是脂质组学分析时，能够显著提高分子的鉴定量，具有高灵敏度、高准确性以及高通量的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	南方科技大学
发明人：	林琳
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910562840.X
公开号：	CN110243985A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N30/72(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区西丽学苑大道1088号
主权项：	1.一种生物分子的质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测方法包括以下步骤： (1)将待测样品进行数据非依赖性质谱采集，得到质谱数据； (2)对步骤(1)得到的质谱数据进行处理，得到检测结果；其中，步骤(1)所述数据非依赖性质谱采集的循环扫描模式包括一级全扫描和数据非依赖性二级扫描，所述数据非依赖性二级扫描的碎裂模式为源内碰撞诱导解离和高能碰撞解离的混合碎裂。 2.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，步骤(1)所述数据非依赖性质谱采集的检测系统为高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统。 3.根据权利要求1或2所述的质谱检测方法，其特征在于，所述源内碰撞诱导解离的电压为10～20eV，优选为12eV。 4.根据权利要求1～3任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，所述高能碰撞解离为多阶碰撞解离或固定破碎能量的碰撞解离；优选地，所述多阶碰撞解离的梯度碎裂能量依次为10％、12％、15％。 5.根据权利要求1～4任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱为C18色谱柱；优选地，所述C18色谱柱的流速为0.2～0.4mL/min，进一步优选为0.3mL/min；优选地，所述C18色谱柱的进样量为5～20μL，进一步优选为10μL；优选地，所述C18色谱柱的规格为：长度100mm，内径2.1mm，颗粒直径1.7μm。 6.根据权利要求1～5任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的A流动相为包含0.1％甲酸和10mM甲酸铵的乙腈-水溶液，B流动相为包含0.1％甲酸和10mM甲酸铵的异丙醇-乙腈溶液；优选地，所述乙腈-水溶液中乙腈和水的体积比为6:4；优选地，所述异丙醇-乙腈溶液中异丙醇和乙腈的体积比为9:1；优选地，所述高效液相色谱的分析梯度为：0～2min，30％B流动相；2～4min，30～43％B流动相；4～4.5min，43～50％B流动相；4.5～17min，50～70％B流动相；17～23min，70～98％B流动相；23～26min，98％B流动相；26～26.1min，98～30％B流动相；26.1～30min，30％B流动相。 7.根据权利要求1～6任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，所述四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统的离子源为电喷雾离子源或纳喷离子源，优选为电喷雾离子源；扫描模式为正离子模式或负离子模式，优选为正离子模式；喷雾电压为2.8～4.0kV，优选为3.5kV；离子传输管温度为280～350℃，优选为320℃；优选地，所述数据非依赖性质谱采集的循环扫描模式为1个一级全扫描和7～20个数据非依赖性二级扫描，进一步优选为10个数据非依赖性二级扫描；优选地，所述一级全扫描的扫描范围为m/z 300～1000；优选地，所述一级全扫描的分辨率为35000或70000，进一步优选为35000；优选地，所述数据非依赖性二级扫描的隔离窗口宽度为35～100Da，进一步优选为70Da；优选地，所述数据非依赖性二级扫描的分辨率为17500或35000，进一步优选为17500；优选地，所述数据非依赖性二级扫描的最大离子注入时间为35～80ms，进一步优选为50ms。 8.根据权利要求1～7任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，步骤(1)所述待测样品选自脂质组学样品、多肽组学样品、蛋白质组学样品、多糖组学样品或寡糖组学样品中的任意一种，优选为脂质组学样品；优选地，所述脂质组学样品为血清脂质组学样品；优选地，所述血清脂质组学样品的制备方法为：将血清与异丙醇混合，漩涡震荡后静置使蛋白沉淀，然后离心并取上清液冻干；冻干后的样品用溶剂复溶，得到所述血清脂质组学样品；优选地，所述血清的体积为100μL；优选地，所述异丙醇为-20℃预冷后的异丙醇；优选地，所述溶剂为异丙醇、甲醇和水的混合溶液；优选地，所述混合溶液中异丙醇、甲醇和水的体积比为50:35:15；优选地，所述溶剂的体积为100μL。 9.根据权利要求1～8任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，步骤(2)所述处理包括去卷积、谱图匹配和假阳性率卡值；优选地，所述去卷积、谱图匹配和假阳性率卡值通过软件MS-DIAL进行。 10.根据权利要求1～9任一项所述的质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测方法具体包括以下步骤： (1)将血清脂质组学样品用高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统进行数据非依赖性质谱采集，得到质谱数据；其中，血清脂质组学样品的制备方法为：将100μL血清与300μL预冷的异丙醇混合，漩涡震荡后静置使蛋白沉淀；离心分离，取上清液冻干；将冻干后的样品用100μL异丙醇、甲醇和水的体积比为50:35:15的混合溶液复溶，得到待测的血清脂质组学样品；高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，流速为0.2～0.4mL/min，进样量为5～20μL，A流动相为包含0.1％甲酸和10mM甲酸铵的乙腈-水溶液，B流动相为包含0.1％甲酸和10mM甲酸铵的异丙醇-乙腈溶液；分析梯度为：0～2min，30％B流动相；2～4min，30～43％B流动相；4～4.5min，43～50％B流动相；4.5～17min，50～70％B流动相；17～23min,70～98％B流动相；23～26min，98％B流动相；26～26.1min，98～30％B流动相；26.1～30min，30％B流动相；四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统的质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，扫描模式为正离子模式，喷雾电压为2.8～4.0kV，离子传输管温度为280～350℃；循环扫描模式为1个一级全扫描和7～20个数据非依赖性二级扫描；一级全扫描的扫描范围为m/z 300～1000，分辨率为35000或70000；数据非依赖性二级扫描的隔离窗口宽度为35～100Da，分辨率为17500或35000，最大离子注入时间为35～80ms；数据非依赖性二级扫描的碎裂模式为源内碰撞诱导解离和高能碰撞解离的混合碎裂，源内碰撞诱导解离的电压为10～20eV，高能碰撞解离为多阶碰撞解离，梯度碎裂能量依次为10％、12％、15％； (2)对步骤(1)得到的质谱数据进行处理，通过软件MS-DIAL进行去卷积、谱图匹配和假阳性率卡值，得到检测结果。
所属类别：	发明专利