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原文传递定量联合检测C-反应蛋白与血清淀粉样蛋白A的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法

专利名称：	定量联合检测C-反应蛋白与血清淀粉样蛋白A的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法
摘要：	本发明揭示了一种定量检测C‑反应蛋白与血清淀粉样蛋白A的试纸条的制备方法，包括：将硝酸纤维素膜包被检测线与质控线，检测线分别使用CRP和SAA包被抗体，质控线分别使用CRP和SAA捕获抗体的二抗；制备结合垫，其包括：离心洗涤捕获抗体，将纳米增强型时间分辨荧光微球与CRP捕获抗体溶解于PBS，加入EDC室温反应30min‑12h；加入封闭液封闭30min‑12小时；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释后定量喷涂到第一载体；其中，捕获抗体为CRP捕获抗体和SAA捕获抗体；还包括制备样品垫，包括将第二载体浸泡于含有0.9％NaCl和0.5‑3％的表面活性剂S9的水溶液中，然后烘干。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州遵道生物科技有限公司
发明人：	刘佳佳;邵伟;王丽君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910641543.4
公开号：	CN110244060A
代理机构：	北京众合诚成知识产权代理有限公司
代理人：	姚炜炜
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	215000 江苏省苏州市苏州工业园区华云路1号桑田岛科创园1号楼301
主权项：	1.定量检测C-反应蛋白与血清淀粉样蛋白A的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括，将硝酸纤维素膜包被检测线与质控线，所述检测线分别使用CRP和SAA包被抗体，所述质控线分别使用CRP和SAA捕获抗体的二抗；还包括制备结合垫，其包括：使用洗涤液离心洗涤捕获抗体，所述洗涤液为硼酸缓冲液；纳米增强型时间分辨荧光微球与捕获抗体溶解于PH6-8、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应30min-12h；加入封闭液封闭30min-12h，所述封闭液含有0.1-1％F68、10-50mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到30-120倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有1-3％吐温20及20％海藻糖或蔗糖；将稀释的微球定量喷涂到第一载体；还包括制备样品垫，其包括将第二载体浸泡于含有0.9％NaCl和0.5-3％表面活性剂S9的水溶液中，然后烘干；其中，所述捕获抗体分别为CRP捕获抗体和SAA捕获抗体；所述百分比浓度为质量百分比。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米增强型时间分辨荧光微球与捕获抗体溶解于PH6、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应30min；加入封闭液封闭12h，所述封闭液含有1％F68、50mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到120倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有3％吐温20及20％海藻糖或蔗糖。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，纳米增强型时间分辨荧光微球与捕获抗体溶解于PH8、浓度0.05mol/L的PBS，加入EDC使终浓度为10mg/ml，室温反应12h；加入封闭液封闭30min，所述封闭液含有0.1％F68、10mmol/ml甘氨酸；离心后PBS洗涤沉淀，使用微球稀释液稀释到30倍，所述微球稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液含有1％吐温20及20％海藻糖或蔗糖。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米增强型时间分辨荧光微球直径为100nm-300nm。 5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述捕获抗体与微球混合的重量比是1/5-1/20。 6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述捕获抗体的洗涤液为PH8-9的0.05硼酸缓冲液。 7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一载体为玻璃纤维膜。 8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二载体为玻璃纤维膜。 9.定量检测CRP和SAA的时间分辨免疫层析试纸条，由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，所述底板、硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫依次交错黏贴，其特征在于，所述试纸条由权利要求1-8任一所述的方法制得。
所属类别：	发明专利