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原文传递 ZBTB5蛋白作为胃癌血清生物标志物的应用及其试剂盒

专利名称：	ZBTB5蛋白作为胃癌血清生物标志物的应用及其试剂盒
摘要：	本发明公开了一种ZBTB5蛋白作为胃癌血清生物标志物的应用及其试剂盒，所述试剂盒包括：包被于酶标板上的ZBTB5蛋白、0U/ml的标准血清1、100U/mL的标准血清2、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液、终止液。本发明提供的抗ZBTB5的免疫球蛋白G抗体作为胃癌血清生物标志物具有高特异性；该试剂盒检测灵敏、安全、操作简单，可以用来定量测定人血清中蛋白质ZBTB5的免疫球蛋白G抗体水平，反映出ZBTB5蛋白的水平，从而用于胃癌诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海四核生物科技有限公司
发明人：	王靖方;庞世超;徐泓淋;杨俊晨
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910516515.X
公开号：	CN110261609A
代理机构：	上海段和段律师事务所
代理人：	李慧;郭国中
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	200030 上海市徐汇区虹桥路333号3幢465室
主权项：	1.一种ZBTB5蛋白作为胃癌血清生物标志物的应用。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ZBTB5蛋白是从经由基因工程改造过的酿酒酵母经半乳糖诱导过量表达，再经琼脂糖亲和介质谷胱甘肽分离纯化而得到。 3.一种胃癌血清生物标志物，其特征在于，包括ZBTB5蛋白。 4.一种胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，包括：包被于酶标板上的ZBTB5蛋白、0U/ml的标准血清1、100U/mL的标准血清2、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液、终止液。 5.根据权利要求4所述的胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液为TMB应用液，包括显色剂A和显色剂B；所述显色剂A以每500mL计，包括以下各组分：醋酸钠10.7-14.2g，柠檬酸0.3-1.9g，30％双氧水0.2-0.6mL；所述显色剂B以每500mL计，包括以下各组分：TMB 200-650mg，DMSO 5-30mL，柠檬酸3.2-7.9g。 6.根据权利要求4所述的胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，所述包被于酶标板上的ZBTB5蛋白的制备中，采用的包被缓冲液为0.05M碳酸盐缓冲液；所述碳酸盐缓冲液包括以下组分：碳酸钠1.59g/L，碳酸氢钠2.93g/L；所述碳酸盐缓冲液的pH值为7.4。 7.根据权利要求4所述的胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液为含有0.5％牛血清白蛋白的、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液，具体包括：牛血清蛋白BSA 5g/L,氯化钠8g/L、氯化钾0.2g/L、磷酸氢二钾0.2g/L、十二水合磷酸氢钠2.9g/L，pH值为7.4。 8.根据权利要求4所述的胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为0.01mol/L的PBS缓冲液，具体包括：氯化钾0.2g/L，氯化钠8g/L，磷酸氢二钠0.2g/L，十二水合磷酸氢钠2.9g/L，pH值为7.4。 9.根据权利要求4所述的胃癌血清标志物检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为0.01mol/L的PBST磷酸盐缓冲液，具体包括：氯化钾0.2g/L、氯化钠8g/L、磷酸氢二钾0.2g/L、十二水合磷酸氢钠2.9g/L、Tween-20 0.5mL/L，pH值为7.4；所述终止液为2mol/L硫酸溶液；所述酶标记物为辣根过氧化物酶标记的人免疫球蛋白G抗体。 10.一种基于权利要求4所述试剂盒测定血清中蛋白质ZBTB5的免疫球蛋白G抗体浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)包被：将纯化的人蛋白质ZBTB5用包被缓冲液稀释至1μg/mL后加入到孔酶标板中，于37℃包被2小时，然后洗涤3次，甩干； (2)封闭：加入封闭液200μL，室温放置2小时，洗涤3次，甩干； (3)加样：将0U/ml标准血清1、100U/ml标准血清2与待测血清样品各按1:100稀释至100μL后加入到各抗原测定孔板中，晃匀后加盖或覆膜； (4)温育：酶标板置于37℃反应120分钟后甩净孔中液体，不用洗涤； (5)加酶标记：每孔加辣根过氧化物酶标记的人免疫球蛋白G抗体100μL，于37℃放置60分钟后甩净孔中液体，洗板5次后拍干。 (6)显色：拍干后各孔滴先后加入显色剂A和显色剂B各50μL，震荡混匀，于37℃避光放置显色15分钟后，加入终止液50μL，终止反应。 (7)用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度，然后进行计算，即得血清中抗蛋白质ZBTB5的免疫球蛋白G抗体浓度。
所属类别：	发明专利