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原文传递一种术中快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的方法

专利名称：	一种术中快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的方法
摘要：	本发明公开一种快速检测人甲状腺球蛋白(Tg)从而快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法和荧光免疫层析技术检测人Tg，所述抗体是利用特定的抗原表位肽制备获得。本发明能够快速准确地检测待测物中的人Tg，操作简便、快速，检测范围宽、特异性高、灵敏度好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏省原子医学研究所
发明人：	邹贤;杨克勤;周彬;李文新;施龙顺;包建东;朱国华;高芸;王国瑞;李秀龙
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910663876.7
公开号：	CN110275014A
代理机构：	北京天盾知识产权代理有限公司
代理人：	曹静;葛宏
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214000 江苏省无锡市钱荣路20号
主权项：	1.一种快速检测人甲状腺球蛋白(Tg)从而快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法和荧光免疫层析技术检测待测样品中的人Tg从而判断是否发生了甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移，其中：所述试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸，该试纸通过双抗体夹心法和荧光免疫层析技术检测人Tg，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一Tg单克隆抗体作为检测抗体，所述第一Tg单克隆抗体利用人Tg抗原表位肽(1)和(2)中的一个作为抗原制备获得；并且所述双抗体夹心法采用第二Tg单克隆抗体作为捕获抗体，所述第二单克隆抗体利用人Tg抗原表位肽(1)和(2)中的另一个作为抗原制备获得；所述人Tg抗原表位肽(1)和(2)分别为： (1)PKRCPRSCEIRNRRLLHGV(SEQ ID NO：2) (2)AERRFQAPEPLNWTGSWDASKPRA(SEQ ID NO：3)。 2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述结合垫设置有所述标记有荧光微球的第一Tg单克隆抗体。 3.根据权利要求1或2所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜包括检测带和质控带，所述检测带固定有所述第二Tg单克隆抗体，所述质控带包被有能与所述标记有荧光微球的第一Tg单克隆抗体特异性结合的抗抗体，所述检测带和质控带间隔3mm至8mm。 4.根据权利要求1或2所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，其中所述荧光微球上的荧光物质为稀土离子铕，或所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。 5.根据权利要求1或2所述的荧光免疫层析试纸，其特征在于，其中所述抗抗体为羊抗鼠IgG多克隆抗体或兔抗鼠IgG多克隆抗体。 6.一种制备根据权利要求1至5中任意一项所述的荧光免疫层析试纸的方法，其包括以下步骤： 1)提供标记有荧光微球的第一Tg单克隆抗体； 2)提供结合垫，其中在所述结合垫上结合有所述标记荧光微球的第一Tg单克隆抗体； 3)提供硝酸纤维素膜，其中在所述硝酸纤维素膜上沿使用时的层析方向间隔固定第二Tg单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测区和质控区； 4)在底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜、吸水纸，从而制成所述荧光免疫层析试纸。 7.根据权利要求6所述的方法，其中所述步骤1)包括：使用pH7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤荧光微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温反应一定时间，洗涤荧光微球，用0.05M pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入标记抗体，室温反应2小时，加入含有10％BSA的0.05M pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤荧光微球，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.05M pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶至原体积，定量喷涂于结合垫上，避光35-38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用。 8.根据权利要求6或7所述的方法，其中在所述步骤3)中，所述检测区和质控区间隔3mm至8mm，所述第二TG单克隆抗体和所述抗抗体的包被浓度分别为0.5～2mg/ml。 9.权利要求1至5中任意一项所述的荧光免疫层析试纸在制备快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的试剂中的用途。 10.一种非诊断目的的快速鉴别甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移的方法，包括利用权利要求1至5中任意一项所述的荧光免疫层析试纸对淋巴结穿刺液进行检测，当检测到淋巴结穿刺液中的Tg为阳性时，说明发生了甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移。
所属类别：	发明专利