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原文传递一种基于LC-MS/MS测定猪肉丸中猪肉含量的方法

专利名称：	一种基于LC-MS/MS测定猪肉丸中猪肉含量的方法
摘要：	本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种基于LC‑MS/MS测定猪肉丸中猪肉含量的方法；本发明选择筛选出来定量较好的猪肉多肽作为分析对象，通过前处理方法提取待测猪肉丸中猪肉特异性多肽，然后进行LC‑MS/MS分析，同时建立普通猪肉对应多肽的标准曲线，以已知猪肉的含量作为横坐标，猪肉定量多肽的峰面积作为纵坐标，从而得到待测猪肉丸中猪肉含量。本发明基于高效液相色谱‑质谱联用技术建立了一种测定猪肉丸中猪肉含量的方法，从而实现对猪肉丸中猪肉含量的检测，该技术体系的建立也将为规范行业标识、维护市场公平提供强有力的技术支持。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国肉类食品综合研究中心
发明人：	王守伟;李莹莹;张颖颖;李家鹏;李石磊;马燕红;李慧晨;陈超;赵奕昕
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910683954.X
公开号：	CN110286181A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	乔凤杰
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100068 北京市丰台区洋桥70号
主权项：	1.一种基于LC-MS/MS测定猪肉丸中猪肉含量的方法，其特征在于，以多肽作为检测的分析对象；所述多肽信息如下：。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对待测猪肉丸进行预处理的步骤： (1)将所述待测猪肉丸研磨均匀，向0.1～0.5g猪肉丸中加入1～5ml缓冲盐提取液，冷冻研磨后离心，取上清液； (2)取20～300μL上清液，加入50mmoL/L二硫苏糖醇溶液10～50μL，56℃振荡反应1h，降温后加入100mmol/L碘乙酰胺溶液20～100μL，暗处反应30min； (3)向上述反应体系中加入50mmol/L NH4HCO3 100μL，然后加入20μg胰蛋白酶，37℃反应过夜；向上述酶解液中加入10％醋酸调pH<2终止反应，并加入1mL0.1％乙酸水，所得溶液用于过柱除盐； (4)将步骤(3)所得溶液用HLB固相萃取柱除盐，收集洗脱液过滤后，准备上机；其中，步骤(1)中所述缓冲盐提取液为0.05mol/L Tris-HCl、6mol/L尿素、2mol/L硫脲，pH 8.0。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述冷冻研磨的条件为：在60Hz下研磨45s；所述离心的条件为：15000r/min离心10min。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)中依次用乙腈、0.1％乙酸水活化HLB固相萃取柱，将步骤(3)所得溶液上样，再依次用水、0.5％乙酸淋洗，最后用1mL 60％乙腈+0.5％乙酸洗脱，收集的洗脱液经0.22μm滤膜过滤。 5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，还包括建立猪肉标准曲线的步骤： (1)称取0.1～0.5g猪肉，加入1～5mL缓冲盐提取液，冷冻研磨后离心，取上清液； (2)取20～300μL上清液，加入50mmoL/L二硫苏糖醇溶液10～50μL，56℃振荡反应1h，降温后加入100mmol/L碘乙酰胺溶液20～100μL，暗处反应30min； (3)向上述反应体系中加入50mmol/L NH4HCO3 100μL，然后加入20μg胰蛋白酶，37℃反应过夜；向上述酶解液中加入10％醋酸调pH<2终止反应，并加入1mL0.1％乙酸水，所得溶液用于过柱除盐； (4)将步骤(3)所得溶液用HLB固相萃取柱除盐，收集洗脱液过滤后，准备上机；其中，步骤(1)中所述缓冲盐提取液为0.05mol/L Tris-HCl、6mol/L尿素、2mol/L硫脲，pH 8.0。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述冷冻研磨的条件为：在60Hz下研磨45s；所述离心的条件为：15000r/min离心10min。 7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)中依次用乙腈、0.1％乙酸水活化HLB固相萃取柱，将步骤(3)所得溶液上样，再依次用水、0.5％乙酸淋洗，最后用1mL 60％乙腈+0.5％乙酸洗脱，收集的洗脱液经0.22μm滤膜过滤。 8.根据权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，LC-MS/MS的条件如下：色谱条件：色谱柱Hypersil GOLD C18；流动相：A相0.1％FA/H2O，B相0.1％ FA/ACN，色谱梯度为：0～2min，5％B；2～10min,5％～40％B；10～16min，40％～80％B；16～18min，80％～5％B；质谱条件：喷雾电压3000V；离子源雾化温度350℃；离子传输管温度300℃；鞘气45Arb；辅气15Arb；碰撞气为1.5mTorr；正模式。
所属类别：	发明专利