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原文传递检测afamin浓度的试剂盒、制备方法及测定afamin浓度的方法

专利名称：	检测afamin浓度的试剂盒、制备方法及测定afamin浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种检测afamin蛋白浓度的试剂盒、制备方法及利用试剂盒检测afamin浓度的方法，检测试剂盒包括试剂1和试剂2，其中所述试剂1包括包被有单克隆抗人afamin抗体的顺磁性微粒；所述试剂2包括单克隆抗人afamin抗体‑碱性磷酸酶结合物。本发明的检测试剂盒具有开放属性，可以应用于多种不同公司的化学发光检测仪器，无需昂贵的专用配套仪器，易于在国内市场推广；而且采用本发明试剂盒检测尿液中afamin浓度的方法灵敏度高、检测时间短、操作简单，并且可同时检测大量样本，提高了检测效率，检测结果准确，为临床上肾病的诊断和治疗提供指导，具有较好的临床实用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京大学第一医院
发明人：	李海霞;逄璐
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910583395.5
公开号：	CN110297094A
代理机构：	北京元本知识产权代理事务所
代理人：	秦力军
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100034 北京市西城区西什库大街8号
主权项：	1.一种检测afamin蛋白浓度的试剂盒，包括试剂1和试剂2，其特征是，所述试剂1包括包被有单克隆抗人afamin抗体的顺磁性微粒；所述试剂2包括单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，所述试剂1还包括TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin 300；所述试剂2还包括TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin300。 3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，试剂1中所述包被有单克隆抗人afamin抗体的顺磁性微粒的浓度为1-2μg/mL，优选为1.5μg/mL；试剂2中所述单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物的浓度为1-2μg/mL，优选为1.5μg/mL。 4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，所述试剂1中的所述包被有单克隆抗人afamin抗体为鼠单克隆抗人afamin抗体、兔单克隆抗人afamin抗体、猪单克隆抗人afamin抗体、牛单克隆抗人afamin抗体或羊单克隆抗人afamin抗体；所述试剂2中所述单克隆抗人afamin抗体为鼠单克隆抗人afamin抗体、兔单克隆抗人afamin抗体、猪单克隆抗人afamin抗体、牛单克隆抗人afamin抗体或羊单克隆抗人afamin抗体。 5.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，还包括afamin标准品、afamin质控品和化学发光底物。 6.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征是，还包括洗液，所述洗液为pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液。 7.一种检测afamin蛋白浓度的试剂盒的制备方法，其特征是，包括如下进行的步骤： 1)将TritonX-100、叠氮钠、ProClin 300溶于1L蒸馏水中，配制第一缓冲系统； 2)将TritonX-100、牛血清白蛋白、叠氮钠、ProClin 300溶于1L蒸馏水中，配制第二缓冲系统； 3)将单克隆抗人afamin抗体、顺磁性微粒加入到第一缓冲系统中，混匀后，于2-8℃放置过夜，进行单克隆抗人afamin抗体包被处理； 4)向包被处理后的混合液中加入第二缓冲系统，于35-38℃下进行封闭处理，封闭处理1.5-3h；制得试剂1，备用； 5)采用过碘酸盐氧化法将单克隆抗人afamin抗体与碱性磷酸酶交联，制成单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物；然后将单克隆抗人afamin抗体-碱性磷酸酶结合物溶于第三缓冲系统，制成试剂2，备用； 6)将afamin纯蛋白标准品用生理盐水配制成浓度分别为0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的afamin标准品； 7)将afamin纯蛋白标准品用生理盐水配制成浓度分别为10.0、60.0ng/mL的afamin质控品； 8)将磷酸氢二钾、磷酸氢二钠溶于蒸馏水中配制成磷酸盐缓冲液洗液，其中洗液的pH7.2-7.4； 9)将试剂1、试剂2、afamin标准品、afamin质控品、化学发光底物Lumi-530试剂、洗液分别密封后与使用说明书置于包装盒中，即得。 8.一种测定afamin浓度的方法，其特征是，包括如下步骤： A)绘制afamin标准曲线分别将试剂盒的试剂1、试剂2与不同浓度的afamin标准品混匀，冲洗3-5次后，再分别加入化学发光底物，然后测定不同浓度afamin标准品的光信号值；以afamin标准品溶液浓度的lg值为横坐标，以不同浓度标准品测定的光信号值为纵坐标，绘制标准曲线，并拟合得到相对应的回归方程； B)样本准备将采集的样本进行离心处理，去除沉淀，取上清液，备用； C)样本测定将试剂盒的试剂1、试剂2与步骤B)制备的样本上清液混匀，冲洗3-5次后，再加入化学发光底物，然后测定样本中afamin蛋白的光信号值；将测得的样本信号值在步骤A)绘制的afamin标准曲线中查找，获得相应的afamin蛋白的浓度；或将测得的光信号值带入相应的回归方程，计算获得相应的afamin蛋白的浓度。 9.如权利要求8所述的方法，其特征是，步骤B)中所述待测样本选择尿液或血清，优选为尿液。
所属类别：	发明专利