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原文传递一种检测血液中林可霉素含量的在线固相萃取液相色谱法

专利名称：	一种检测血液中林可霉素含量的在线固相萃取液相色谱法
摘要：	本发明属于医学检验领域，涉及体内抗菌药物含量测定方法，具体涉及一种检测血液中林可霉素含量的在线固相萃取液相色谱法。种检测血液中林可霉素含量的在线固相萃取液相色谱法，对待测血样进行预处理后，通过高效液相色谱仪采用标准曲线法测定林可霉素含量本发明所述的检测血液中林可霉素药物浓度的在线固相萃取液相分析方法，血浆经过蛋白沉淀后直接进样，减少了人员操作，提高了定量结果的准确性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江嘉圣生物医药有限公司
发明人：	管燕;贺耘
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910711268.9
公开号：	CN110308236A
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	314100 浙江省嘉兴市嘉善县大云镇创业路555号C7幢一层
主权项：	1.一种检测血液中林可霉素含量的在线固相萃取液相色谱法，其特征在于，包括如下步骤： (1)血浆样品的预处理：取待测样品，加入蛋白沉淀剂进行沉淀； (2)标准曲线的绘制:取20uL标准工作液，加入空白血浆至1ml，混匀至成6个浓度的标准溶液，将获得的标准溶液分别加入蛋白沉淀剂进行沉淀，9000-15000rpm下离心10-15min，分别取上清液用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述上清液进行检测，得出上述标准溶液中的林可霉素谱图，以林可霉素的峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有林可霉素的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝ax+b，并且得出权重系数a、b及相关系数R2；该标准曲线至少用三份不同批次的标准工作液绘制三次；标准工作液是含有林可霉素的溶液； (3)检测血液的离心:取待检测血液至少2ml，在离心速度为3500-4500rpm下离心10-15min，得到上清液，将上述上清液置于-20℃冷冻下保存备用； (4)待测样品的检测： S1:用水浴加热(37℃)，将步骤(3)中的上清液复融； S2:用移液枪移取步骤S1中复融后的上清液800-1000uL按步骤(1)进行预处理后，离心得上清液即为待测样品； S3:移取步骤(c)待测样品600-800uL，使用高效液相色谱仪和DAD检测器对上述待测样品进行检测，得出上述待测样品的林可霉素色谱图，将上述色谱图中的林可霉素峰面积y代入上述步骤(2)的标准曲线方程y＝ax+b中，通过计算得到待检测样品中林可霉素的浓度。 2.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述的蛋白沉淀剂为乙腈。 3.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中的标准工作液为0.5、2.0、4.5、7.5、11.0和15.0μg/mL浓度的林可霉素溶液。 4.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中高效液相色谱仪包括进样模块、液相泵模块、柱温模块和检测器模块，还包括萃取泵、补液泵、六通阀、分析柱及SPE柱。 5.根据权利要求4所述的的液相色谱法，其特征在于：所述的SPE柱的流动相为0.02-0.04％的磷酸水溶液，流速为0.4-0.5mL/min，所述的SPE柱采用反冲模式。 6.根据权利要求4所述的液相色谱法，其特征在于：所述的分析柱的流动相为30％的有机相和70％的水相，所述有机相为乙腈，所述水相为0.02-0.04％的磷酸水溶液；流速为1-1.2mL/min，所述分析柱采用梯度洗脱方式。 7.根据权利要求根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述步骤(2)中所述DAD检测器的检测波长为246nm。
所属类别：	发明专利