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原文传递一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法

专利名称：	一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法
摘要：	本发明涉及一种含色素组织免疫组化染色试剂盒及染色方法，属于免疫染色技术领域。本发明中的染色试剂盒中过氧化物酶封闭剂可以对组织的内源性过氧化物酶进行封闭，避免内源性过氧化物酶对于染色结果的影响；过氧化物酶标二抗聚合物是基于HRP酶标系统，具有较高的灵敏度；基于过氧化物酶系统的蓝染底物和与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液构成蓝染显色液，蓝染显色液在HRP酶的催化作用下，在抗原靶标位置形成蓝色的颗粒沉淀，可在显微镜下观察；并且在组织的阳性部位定位准确，信号清晰，与有色物质（黑色素或碳颗粒）对比鲜明，免疫组化结果清晰可辩。本发明中的酶标体系灵敏度高，特异性好，染色背景干净。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南赛诺特生物技术有限公司
发明人：	牛银银;刘玲玲;米贯勋;杨潇燕;臧素芳;齐华;李道明;张会娟;曹巍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910696606.6
公开号：	CN110320087A
代理机构：	郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：	牛爱周;吴晓亭
分类号：	G01N1/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新技术产业开发区翠竹街1号109号
主权项：	1.一种含色素组织免疫组化染色试剂盒，其特征在于：包括过氧化物酶封闭剂、过氧化物酶标二抗聚合物、基于过氧化物酶系统的蓝染底物、与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液和红色衬染剂。 2.根据权利要求1所述的含色素组织免疫组化染色试剂盒，其特征在于：所述蓝染底物中包括：联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl、氯化钠和丙二醇；所述蓝染缓冲液中包括NiCl2、H2O2、Tris-HCl、氯化钠和甘油。 3.根据权利要求2所述的含色素组织免疫组化染色试剂盒，其特征在于：所述蓝染底物的pH为7.3-7.9；所述蓝染底物中联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl 缓冲液、氯化钠和丙二醇的质量-摩尔-体积比为8-12g：0.3-0.7g：0.05-0.15mol：0.05-0.15mol：450-550mL。 4.根据权利要求2所述的含色素组织免疫组化染色试剂盒，其特征在于：所述蓝染缓冲液的pH为7.3-7.9；所述蓝染缓冲液中NiCl2·6H2O、H2O2、Tris-HCl、氯化钠和甘油的质量-摩尔-体积比为4-7g：0.5-1.5g：0.05-0.15mol：0.05-0.15mol：45-55mL。 5.一种含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：包括如下步骤： 1）取待检测的含色素组织切片滴加过氧化物酶封闭剂，进行内源性过氧化物酶的封闭； 2）使用靶标抗体对组织切片进行孵育，然后使用过氧化物酶标二抗聚合物进行孵育； 3）使用蓝染显色液对组织切片于常温孵育染色5-10min；所述蓝染显色液中包括：基于过氧化物酶系统的蓝染底物和与蓝染底物匹配的蓝染缓冲液； 4）使用红色衬染剂对组织切片进行衬染。 6.根据权利要求5所述的含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：所述蓝染底物中包括：联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl、氯化钠和丙二醇；所述蓝染缓冲液中包括NiCl2、H2O2、Tris-HCl、氯化钠和甘油。 7.根据权利要求6所述的含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：所述蓝染底物的pH为7.3-7.9；所述蓝染底物中联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵、6-甲氧基-2-萘酚、Tris-HCl缓冲液、氯化钠和丙二醇的质量-摩尔-体积比为8-12g：0.3-0.7g：0.05-0.15mol：0.05-0.15mol：450-550mL；所述蓝染缓冲液的pH为7.3-7.9；所述蓝染缓冲液中NiCl2·6H2O、H2O2、Tris-HCl、氯化钠和甘油的质量-摩尔-体积比为4-7g：0.5-1.5g：0.05-0.15mol：0.05-0.15mol：45-55mL；所述蓝染底物中联苯3,3,’4,4’-四氯化四亚铵的使用浓度为0.04-0.06%；所述蓝染缓冲液中氯化钠的使用浓度为0.05-0.15mol/L。 8.根据权利要求5所述的含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：所述含色素组织为黑色瘤组织或肺腺癌组织。 9.根据权利要求8所述的含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：当所述含色素组织为黑色瘤组织时，所述靶标抗体为HMB45、Melan A、S100或CD63抗体。 10.根据权利要求8所述的含色素组织免疫组化染色方法，其特征在于：当所述含色素组织为肺腺癌组织时，所述靶标抗体为EMA或CD68抗体。
所属类别：	发明专利