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原文传递区分不同时期精母细胞的方法及在生精分期等方面的应用

专利名称：	区分不同时期精母细胞的方法及在生精分期等方面的应用
摘要：	本发明公开了一种区分不同时期精母细胞的方法及其在生精分期、雷公藤甲素致睾丸损伤中的应用。该方法采用睾丸标本的石蜡切片进行γ‑H2AX免疫组化染色来区分不同时期精母细胞。采用γ‑H2AX免疫组化染色，仅通过对阳性着色的精母细胞类型及染色强度进行区分，便可以对小鼠睾丸生精上皮精子发生周期的第Ⅶ‑Ⅻ期进行更精确、简便的划分，而且还可以确定雷公藤甲素致睾丸损伤的敏感细胞。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	安领生物医药(苏州)有限公司
发明人：	李明;修晓宇;任进
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910654189.9
公开号：	CN110376365A
代理机构：	上海京沪专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨金淑
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	215000 江苏省苏州市金鸡湖大道99号苏州纳米城西北区11栋504室
主权项：	1.一种区分不同时期精母细胞的方法，其特征在于，采用睾丸标本的石蜡切片进行γ-H2AX免疫组化染色，其中： γ-H2AX着色在细胞核内呈多点状，为细线前期精母细胞；γ-H2AX着色覆盖整个细胞核，为细线期精母细胞；γ-H2AX着色面积减少，集中在核染色质上，为偶线期精母细胞；γ-H2AX着色在核边缘呈一点状，为粗线期精母细胞；γ-H2AX着色在细胞核内的非核边缘呈一点状，为双线期精母细胞。 2.如权利要求1所述的区分不同时期精母细胞的方法，其特征在于，所述γ-H2AX免疫组化染色采用抗-γH2AX(phospho-Ser139)兔单克隆抗体，克隆号RM224和羊抗兔IgG二抗。 3.如权利要求1所述的区分不同时期精母细胞的方法，其特征在于，所述睾丸标本的石蜡切片来自小鼠。 4.一种生精分期判定方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的方法来区分不同时期精母细胞；根据不同时期精母细胞的存在与否来对第VII期到第XII期生精小管进行判定，具体为：存在细线前期精母细胞的为第Ⅶ、Ⅷ期生精小管；存在细线期精母细胞的为第Ⅸ、Ⅹ期生精小管；存在偶线期精母细胞和/或双线期精母细胞的为第Ⅺ、Ⅻ期生精小管；所述第VII期到第XII期生精小管来自小鼠睾丸。 5.如权利要求1所述的区分不同时期精母细胞的方法在生精分期判定中的应用。 6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，根据不同时期精母细胞的存在与否来对第VII期到第XII期生精小管进行判定，具体为：存在细线前期精母细胞的为第Ⅶ、Ⅷ期生精小管；存在细线期精母细胞的为第Ⅸ、Ⅹ期生精小管；存在偶线期精母细胞和/或双线期精母细胞的为第Ⅺ、Ⅻ期生精小管。 7.如权利要求1所述的区分不同时期精母细胞的方法在化合物和/或组合物对睾丸的损伤中的应用。 8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述化合物为雷公藤甲素。 9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，用于在不同时期精母细胞中检测对雷公藤甲素睾丸损伤的敏感细胞。 10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，采用如权利要求1所述的区分不同时期精母细胞的方法对不同时期精母细胞进行识别；然后，对雷公藤甲素致睾丸损伤的标本进行细线期、偶线期、粗线期、双线期精母细胞的分类计数；其中所述雷公藤甲素致睾丸损伤的标本为雄性C57BL/6小鼠经口灌胃给与雷公藤甲素11天后的标本；所述雷公藤甲素的给药剂量是0.125mg/kg到0.5mg/kg；比较细线期、偶线期、粗线期、双线期精母细胞的下降比率，找出下降比率明显更高且具有统计学意义的那一组或几组即为所述敏感细胞；各期精母细胞下降比率由雷公藤甲素处理组与生理盐水处理组比值得到；T检验求得P值，数据以平均数+/-标准差形式表示，N＝4。
所属类别：	发明专利