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原文传递一种蛋鸭应激状态的鉴别方法

专利名称：	一种蛋鸭应激状态的鉴别方法
摘要：	本发明提供了一种蛋鸭应激状态鉴别方法，所述方法包括：(1)笼养蛋鸭血液经处理得到的血浆作为待测组样品，平养蛋鸭血液经处理得到的血浆为对照组样品；(2)采用色谱‑质谱分析，得到质谱结果；(3)对下机数据库进行分析后，得到代谢物的鉴定结果和代谢物丰度结果；(4)对待测组样品和对照组样品中的特征标志物的表达量进行T‑检验；待测组样品和对照组样品相比，若2‑花生四烯酰甘油的表达量出现显著下调(P＜0.05)，即蛋鸭正处于笼养应激反应期；否则蛋鸭正处于笼养应激恢复期。该方法能够简便、准确地鉴别蛋鸭应激状态。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
发明人：	张昊;吴艳;陈芳;梁振华;皮劲松;潘爱銮;梁逸夫;杜金平
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910527954.0
公开号：	CN110361460A
代理机构：	武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	赵泽夏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430064 湖北省武汉市洪山区南湖瑶苑特4号畜牧所
主权项：	1.一种蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，以2-花生四烯酰甘油作为鉴别蛋鸭应激状态的特征标志物。 2.如权利要求1所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：步骤1、笼养蛋鸭血液经处理得到的血浆作为待测组样品，平养蛋鸭血液经处理得到的血浆为对照组样品；步骤2、采用色谱-质谱分析所述待测组样品，得到质谱结果；步骤3、对质谱结果中的下机数据库进行分析后，得到代谢物的鉴定结果和代谢物丰度结果；步骤4、对待测组样品和对照组样品中的特征标志物2-花生四烯酰甘油的表达量进行T-检验；待测组样品和对照组样品相比，若待测组样品的2-花生四烯酰甘油的表达量出现下调，且差异显著P＜0.05，则表示蛋鸭正处于笼养应激反应期；否则蛋鸭正处于笼养应激恢复期。 3.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤1中血液经处理得到血浆的具体步骤为：血样先经肝素钠抗凝，然后在5000rpm、4℃离心10min后，获得血浆，液氮冻存，备用。 4.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤1中采集已知日龄及上笼天数的笼养蛋鸭血浆样品作为待测组样品；对照组样品为与待测组样品笼养组品种相同，日龄相近±8d的平养蛋鸭血浆样品；每组样本数3-10份，不同上笼天数即为不同待测组样品。 5.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤2中色谱-质谱的中的具体参数为：色谱采用Accucore HILIC column色谱柱，柱温：40℃；流速：0.2mL/min；正模式中以0.1％甲酸，95％乙腈，10mM醋酸铵为流动相A；0.1％甲酸，50％乙腈，10mM醋酸铵为流动相B；负模式中以95％乙腈，10mM醋酸铵为流动相A；50％乙腈，10mM醋酸铵为流动相B，负模式A、B流动相pH均为9.0；梯度洗脱为：0-1.5min：98％A，2％B；1.5-12min：98％A，2％B；12-14min：100％B；14-16min：98％A，2％B。 6.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤2中色谱-质谱的中的具体参数为：质谱扫描范围选择m/z 100-1500；质谱条件的设置如下：喷雾电压：3.2kV；鞘流气，辅助气压力分别为35arb和10arb；离子传输管温度为：320℃；极性：正极，负极；MS/MS二级扫描为数据依赖型扫描。 7.如权利要求2所述的蛋鸭应激状态的鉴别方法，其特征在于，所述步骤3中对质谱结果中的下机数据库进行分析的具体步骤为： S1、将下机数据导入CD搜库软件中，进行保留时间、质荷比参数的简单筛选； S2、然后对不同样品根据保留时间偏差0.1min和质量偏差5ppm进行峰对齐，随后根据设置的质量偏差5ppm、信号强度偏差30％、信噪比3、最小信号强度100000、加和离子等信息进行峰提取，同时对峰面积进行定量； S3、再整合目标离子，然后通过分子离子峰和碎片离子进行分子式的预测并与mzCloud和Chemspider数据库进行比对，用blank样本去除背景离子，并对定量结果进行归一化，最后得到代谢物鉴定结果和定量结果。
所属类别：	发明专利