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原文传递一种胶体金免疫层析卡的制备方法

专利名称：	一种胶体金免疫层析卡的制备方法
摘要：	本发明公开了一种胶体金免疫层析卡的制备方法，包括底板、上样垫、胶体金结合垫、层析膜和吸样垫，上样垫、胶体金结合垫、层析膜和吸样垫依次粘贴在底板上，所述胶体金结合垫为包被胶体金标记DMD抗体的玻璃纤维膜或聚酯膜，所述层析膜为包被DMD抗体的硝酸纤维素膜,本发明对DMD基因的79个外显子、两侧相邻50bp内含子序列和已知位于内含子区突变附近序列设计并合成探针，DMD基因相关致病突变序列进行富集(外显子与内含子突变、包括了点突变和结构重排、已知突变和未知突变)构建蛋白抗体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉塞力斯生物技术有限公司
发明人：	鲁翌;林霞;田树伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-29T00:00:00+0800
申请号：	CN201910658396.1
公开号：	CN110389222A
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东西湖区金山大道1310号
主权项：	1.一种胶体金免疫层析卡的制备方法，包括底板(3)、上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、层析膜(4)和吸样垫(5)，其特征在于，上样垫(1)、胶体金结合垫(2)、层析膜(4)和吸样垫(5)依次粘贴在底板(3)上，所述胶体金结合垫(2)为包被胶体金标记DMD抗体的玻璃纤维膜或聚酯膜，所述层析膜(4)为包被DMD抗体的硝酸纤维素膜。 2.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析卡的制备方法，其特征在于：所述层析膜(4)的两端分别搭接有吸样垫(5)、胶体金结合垫(2)，所述胶体金结合垫(2)的另一端搭接有上样垫(1)，所述上样垫(1)搭接压住胶体金结合垫(2)的1/4，所述胶体金结合垫(2)搭接压住层析垫的1/5，所述吸样垫(5)搭接压住胶体金结合垫(2)的1/12。 3.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析卡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：胶体金溶液制备：向100ml HauCl4的0.01％水溶液中加入1％柠檬酸三钠水溶液2.00— 4.50mL，混匀煮沸，保持沸腾30min得到直径为5-20nm的胶体金溶液；胶体金结合垫制备：将胶体金溶液调至pH7.0-9.0后加入6μg/mL-15μg/mLDMD抗体和封闭剂，10000rpm离心30min，将离心下来的沉淀复溶至含有BSA、蔗糖的胶体金溶液中，将复溶产物加至玻璃纤维膜或聚酯膜后干燥；层析垫制备：将DMD抗体用0.01M，pH为7.4的PBS稀释成0.5mg/mL、1.5mg/mL，羊抗鼠IgG分别稀释成1mg/mL、2mg/mL，检测线J包被DMD抗体，质控线Z包被羊抗鼠IgG，然后用喷膜仪在硝酸纤维素膜上按1.2μL/cm进行划线包被后干燥；试纸卡组装：将已包被的层析膜(4)放置在底板(3)的中部粘贴，在层析膜(4)的T线一侧搭接胶体金结合垫(2)，搭胶体金结合垫(2)的1/5粘贴，在胶体金结合垫(2)另一侧搭接粘贴上样垫(1)，搭胶体金结合垫(2)的1/4粘贴；在层析膜(4)的C线一侧搭接吸样垫(5)，搭吸样垫(5)的1/12粘贴；用裁剪机将贴好的底板(3)切成3～5mm宽的试纸条，再装入塑料卡内，形成试纸卡，任选地，所述封闭剂为1％BSA或0.1％PEG-20000。 4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述试纸卡组装是在温度为20～25℃，湿度小于30％的室内完成的。
所属类别：	发明专利