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原文传递一种组织学切片染色方法

专利名称：	一种组织学切片染色方法
摘要：	本发明提供一种HE染色方法，包括(1)将生物组织切片、烘干、脱蜡，梯度酒精水化至水；(2)采用天青石蓝溶液浸泡；(3)采用苏木素染液染色；(4)水流冲洗至蓝化；(5)梯度酒精脱水；(6)采用伊红染液染色；(7)采用二甲苯透明；(8)封片。本发明苏木素染液体系中添加了乙酸，且苏木素染色经蓝化后，直接进行脱水步骤，至100％酒精后进行伊红染色，50％的醇溶液中滴加适量乙酸。通过该步骤创新，伊红染色调整到脱水步骤之后，保证脱水的梯度酒精无污染，使梯度酒精循环使用次数显著增加，大大降低了实验成本。并且调整后伊红染液的染色时间大幅度缩短，缩短了染色周期,染色的质量显著提高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京农业大学
发明人：	史志成;石放雄;刘迎;王喆;薛洋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910746962.4
公开号：	CN110361246A
代理机构：	南京天华专利代理有限责任公司
代理人：	竞存;徐冬涛
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	211225 江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地
主权项：	1.一种用于HE染色的天青石蓝溶液，其特征在于，所述天青石蓝溶液包括天青石蓝B、硫酸铁铵、甘油、蒸馏水；所述天青石蓝B、硫酸铁铵、甘油、蒸馏水的重量体积比为重量体积比为2.5g：25g：50ml：450ml。所述天青石蓝溶液通过将硫酸铁铵溶解于冷蒸馏水中，搅拌均匀后加入天青石蓝B煮沸溶解，冷却过滤，加入甘油后配置得到，用前过滤。 2.一种用于HE染色的苏木素染液，其特征在于，所述苏木素染液包括苏木素、钾明矾、碘酸钠、柠檬酸、水合氯醛AR、蒸馏水；所述苏木素、钾明矾、碘酸钠、柠檬酸、水合氯醛AR、蒸馏水质量比为1:50:0.2:1:30:1000；所述苏木素染液通过将苏木素、钾明矾和碘酸钠在蒸馏水里室温过夜溶解后，加入水合氯醛AR和柠檬酸，混合物煮沸后5分钟，冷却过滤后配置得到，用前过滤。 3.一种用于HE染色的伊红染液，其特征在于，所述伊红染液包括1％伊红Y、1％四溴四氯荧光素钠B、100.％酒精、乙酸、麝香草芬；所述伊红染液中，1％伊红Y、1％四溴四氯荧光素钠B、100.％酒精、乙酸的体积比为5:1:93:1:4，所述1％伊红Y、1％四溴四氯荧光素钠B、100.％酒精、乙酸的混合液与麝香草芬的比为250ml:1g；所述伊红染液通过将1％伊红Y和1％四溴四氯荧光素钠B依次混入100％酒精后，加入乙酸，最后加入麝香草芬低温避光溶解后配置得到，使用前4个月制备，密封备用。 4.权利要求1所述的天青石蓝溶液或权利要求2所述的苏木素染液或权利要求3所述的伊红染液在HE染色中的应用。 5.一种组织学切片HE染色方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)将生物组织切片、烘干、脱蜡，梯度酒精水化至水； (2)采用权利要求1所述的天青石蓝溶液浸泡5分钟； (3)采用权利要求2所述的苏木素染液染色； (4)水流冲洗至蓝化，所述冲洗时间不超过5分钟； (5)梯度酒精脱水； (6)采用权利要求3所述的伊红染液染色3～15秒，优选的，染色5秒； (7)采用二甲苯透明两次，每次3分钟； (8)封片。 6.根据权利要求5所述的组织学切片HE染色方法，其特征在于，步骤(1)所述生物组织为动物组织，优选的，为动物睾丸组织、肝脏组织、肾脏组织、肌肉组织或小肠组织，更优选的，所述组织切片厚度为3～5μm。 7.根据权利要求5所述的组织学切片HE染色方法，其特征在于，步骤(1)中所述脱蜡为采用二甲苯浸泡两次，每次6分钟，后用50.％二甲苯与50％酒精等体积混合后浸泡3分钟。 8.根据权利要求7所述的组织学切片HE染色方法，其特征在于，所述两次浸泡所用的二甲苯分别编号回收，于步骤(7)中逆序重复使用。 9.根据权利要求5所述的组织学切片HE染色方法，其特征在于，步骤(1)中所述水化的为依次采用体积浓度为100％、100％、90％、80％、70％、50％的酒精梯度处理；优选的，水化所用的梯度酒精分别回收，于后续的步骤(1)的水化或步骤(5)中重复使用；优选的，所述两份100％酒精分别编号并回收，于步骤(5)中逆序重复使用。 10.根据权利要求5所述的组织学切片HE染色方法，其特征在于，步骤(5)中所述脱水为依次采用体积浓度为50％、70％、80％、90％、100％、100％的酒精梯度处理，所述50％酒精中加入浓度为6％的乙酸；优选的，脱水所用的梯度酒精分别回收重复使用。
所属类别：	发明专利