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原文传递穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及动物疫病检测领域，具体而言，提供了一种穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明提供的试剂盒包括水貂阿留申病毒单抗诊断液和试纸，试纸包括带有检测点和质控点的硝酸纤维素膜；所述水貂阿留申病毒单抗诊断液含有胶体金标记的水貂阿留申病毒单克隆抗体A1，检测点包括T1点和T2点，T1点包被有水貂阿留申病毒单克隆抗体B1，T2点包被有标准水貂阿留申病毒，质控点包被有质控抗体。该试剂盒具有可同时检测水貂阿留申病毒抗原和抗体的功能，可以检测出样品是否感染阿留申病毒以及是否产生了阿留申病毒抗体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	中国农业科学院特产研究所
发明人：	王振军;罗国良;程悦宁;郭利;易立;冯二凯;程世鹏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910787570.2
公开号：	CN110376375A
代理机构：	北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	徐乐
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130112 吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号
主权项：	1.一种穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于，包括水貂阿留申病毒单抗诊断液和试纸，所述试纸包括带有检测点和质控点的硝酸纤维素膜；所述水貂阿留申病毒单抗诊断液含有胶体金标记的水貂阿留申病毒单克隆抗体A1；所述检测点包括T1点和T2点；所述T1点包被有水貂阿留申病毒单克隆抗体B1；所述T2点包被有标准水貂阿留申病毒；所述质控点包被有质控抗体；水貂阿留申病毒单克隆抗体A1和标准水貂阿留申病毒的结合位点不同于水貂阿留申病毒单克隆抗体B1和标准水貂阿留申病毒的结合位点。 2.根据权利要求1所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于，所述水貂阿留申病毒单抗诊断液的溶液包括：4-6w/v％BSA、9-11w/v％蔗糖、0.15-0.25mol/LTris和0.01-0.05w/v％叠氮钠，pH8.0-8.5。 3.根据权利要求1所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试纸还包括样品吸收垫，所述样品吸收垫位于所述硝酸纤维素膜的正下方。 4.根据权利要求1-3任一项所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试纸还包括外壳，所述外壳设有观察窗，所述硝酸纤维素膜对应设置在所述观察窗处。 5.根据权利要求1-3任一项所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液，所述样品稀释液包括：0.15-0.25M Tris-HCl、1.5-2.5w/v％蔗糖、0.05-0.15v/v％Tween20、0.05-0.15v/v％tritonX-100、0.05-0.15w/v％BSA和0.01-0.05w/v％叠氮钠，pH8.0-8.5。 6.权利要求1-5任一项所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： a)水貂阿留申病毒单克隆抗体A1与胶体金溶液混匀反应，收集固体反应物，再依次经封闭、浓缩得到水貂阿留申病毒单抗诊断液； b)将水貂阿留申病毒单克隆抗体B1、标准水貂阿留申病毒和质控抗体分别点膜包被于硝酸纤维膜上，分别形成T1点、T2点和质控点。 7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述水貂阿留申病毒单克隆抗体A1的制备方法包括：利用水貂阿留申病毒对小鼠进行多点皮下及脚垫综合免疫，免疫完成后2-4天取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选出能够分泌特异性水貂阿留申病毒单克隆抗体的细胞株并扩大培养，制备得到水貂阿留申病毒单克隆抗体A1；优选地，所述骨髓瘤细胞为体内培养法得到，具体包括：将培养的骨髓瘤细胞注入小鼠体内培养诱生瘤体，当瘤体直径增大至1.5-2.5cm时，解剖小鼠取出瘤体，分离得到骨髓瘤细胞。 8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述水貂阿留申病毒单克隆抗体B1的制备方法包括：利用水貂阿留申病毒对小鼠进行多点皮下及脚垫综合免疫，免疫完成后2-4天取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选出能够分泌特异性水貂阿留申病毒单克隆抗体的细胞株并扩大培养制备得到水貂阿留申病毒单克隆抗体B1；优选地，所述骨髓瘤细胞为体内培养法得到，具体包括：将培养的骨髓瘤细胞注入小鼠体内培养诱生瘤体，当瘤体直径增大至1.5-2.5cm时，解剖小鼠取出瘤体，分离得到骨髓瘤细胞。 9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，水貂阿留申病毒单克隆抗体A1与胶体金溶液的混合比例为(30μg-40μg):1mL；优选地，所述胶体金溶液中的胶体金粒径为20-30nm；优选地，水貂阿留申病毒单抗诊断液的溶液包括：4-6w/v％BSA、9-11w/v％蔗糖、0.15-0.25mol/L Tris和0.01-0.05w/v％叠氮钠，pH8.0-8.5。 10.权利要求1-5任一项所述的穿流式水貂阿留申病毒抗原抗体检测试剂盒在如下a)或b)中应用： a)制备检测水貂是否感染水貂阿留申病毒的产品； b)制备检测水貂是否产生水貂阿留申病毒抗体的产品。
所属类别：	发明专利