详情

原文传递一种电化学酶联免疫传感器及其制备与检测抗原的应用

专利名称：	一种电化学酶联免疫传感器及其制备与检测抗原的应用
摘要：	本发明涉及一种电化学酶联免疫传感器及其制备与检测抗原的应用，属于蛋白检测技术领域。本发明制备了一种电化学酶联免疫探针，将抗原加入到磁珠与捕获抗体的生物共轭物中进行孵育，在外加磁场条件下移除上层清液后，加入纳米金、检测抗体和酶的生物共轭物进行孵育，经过双抗体夹心反应后，即得到电化学酶联免疫探针。将该探针的分散液修饰在碳糊基底电极表面，得到电化学酶联免疫传感器，本发明所提出的电化学酶联免疫传感器(MB‑eElisa)的线性范围为：0.01‑6.0ng mL‑1，检出限为：4.0pg mL‑1(S/N＝3)；与现有的电化学免疫检测方法对比，该方法具有较低的检出限和较高的灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中科技大学
发明人：	吴康兵;郝俊兴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910678544.6
公开号：	CN110376380A
代理机构：	华中科技大学专利中心
代理人：	孙杨柳;曹葆青
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号
主权项：	1.一种电化学酶联免疫探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)磁珠与捕获抗体的生物共轭物的制备：将磁珠与捕获抗体进行孵育，使所述捕获抗体与磁珠共价连接，再加入封闭蛋白，所述封闭蛋白用于封闭所述磁珠表面未被捕获抗体键合的基团，得到磁珠与捕获抗体的生物共轭物； (2)纳米金、检测抗体和酶的生物共轭物的制备：将检测抗体和至少一种酶加入到纳米金溶液中，使检测抗体和酶共价连接到所述纳米金表面，再加入封闭蛋白，所述封闭蛋白用于封闭所述纳米金表面裸露的位点，得到纳米金、检测抗体和酶的生物共轭物； (3)电化学酶联免疫探针的制备：将抗原加入到步骤(1)得到的磁珠与捕获抗体的生物共轭物中进行孵育，所述抗原与所述捕获抗体以及与检测抗体能特异性地结合；在外加磁场条件下移除上层清液后，再加入步骤(2)得到的纳米金、检测抗体和酶的生物共轭物进行孵育，经过双抗体夹心反应后，即得到电化学酶联免疫探针。 2.如权利要求1所述的电化学酶联免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)所述的封闭蛋白为牛血清蛋白；所述酶为碱性磷酸酶、DT-心肌黄酶、辣根过氧化氢酶或葡萄糖氧化酶。 3.如权利要求1-2任一所述方法制备得到的电化学酶联免疫探针。 4.一种电化学酶联免疫传感器的制备方法，其特征在于，将权利要求3所述的电化学酶联免疫探针的分散液滴涂在基底电极表面，所述基底电极为碳糊电极，待所述分散液晾干后，使所述电化学酶联免疫探针修饰在基底电极表面，即得到电化学酶联免疫传感器。 5.如权利要求4所述的电化学酶联免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述基底电极为氧化锌石墨烯纳米复合物修饰的碳糊电极。 6.如权利要求4或5所述方法制备得到的电化学酶联免疫传感器。 7.如权利要求6所述电化学酶联免疫传感器用于检测抗原的应用。 8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述电化学酶联免疫传感器置于含有底物的电解质中孵育，使所述底物与传感器表面的探针中的酶发生酶解反应，检测酶解产物的电化学信号，并计算得到所述抗原的浓度。 9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述电解质中含有表面活性剂；优选地，所述表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠或十二烷基苯磺酸钠。 10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗原为癌胚抗原、甲胎蛋白或前列腺特异蛋白；所述酶为碱性磷酸酶，所述底物为苯基磷酸盐；优选地，所述底物为1-萘基磷酸盐或苯二基磷酸盐。
所属类别：	发明专利