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原文传递一种评估公猪精子质量的方法

专利名称：	一种评估公猪精子质量的方法
摘要：	本公开提供了一种评估公猪精子质量的方法，具体步骤为：首先采集精液，然后将精液洗涤去除精浆，再离心得到精子，然后将精子稀释，最后分别对稀释的精子的外在指标和内在指标进行检测，所述内在指标的检测方法为FCM流式细胞术。所述方法分别对精子的外在指标和内在指标进行检测，解决了现有检测技术对检测猪精子质膜完整性、顶体膜完整性、线粒体活性、氧化力不足的问题，建立了一种全面评估猪精子质量的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	佛山科学技术学院
发明人：	李飞龙;赵云翔;罗苑华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910593145.X
公开号：	CN110426339A
代理机构：	广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：	朱继超
分类号：	G01N15/14(2006.01);G;G01;G01N;G01N15
申请人地址：	528000 广东省佛山市南海区狮山镇广云路33号
主权项：	1.一种评估公猪精子质量的方法，其特征在于，具体步骤为：首先采集精液，然后将精液洗涤去除精浆，再离心得到精子，然后将精子稀释，最后分别对稀释的精子的外在指标和内在指标进行检测，所述内在指标的检测方法为FCM流式细胞术。 2.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精液洗涤是利用磷酸缓冲液或BWW培养液洗涤，所述离心的温度为4℃，离心转速为850rpm/min，离心时间为5min，所述精子的稀释浓度为0.2-0.5亿/ml，所述精子的稀释液为葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄液。 3.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子外在指标的检测是利用CASA系统进行检测。 4.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子外在指标分别为密度检测、活力检测和畸形率检测。 5.根据权利要求书1中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精子检测内在指标分别为： (1)精细胞质膜的完整性检测； (2)精细胞中线粒体活性检测； (3)精细胞的氧化力检测； (4)精细胞顶体的完整性检测； (5)细菌的浓度检测。 6.根据权利要求书5所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞质膜完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 1 viability and concentration荧光染料对精子进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。 7.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞中线粒体活性检测的步骤为：首先使用EASYKIT 2 Mitochondrial activity荧光染料对精细胞中的中端线粒体部位进行染色，然后通过流式细胞仪进行检测。 8.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞氧化力检测的步骤为：首先用0.8-5mmol/L H2O2处理精细胞，然后使用EASYKIT 3 Oxidationmolecule D荧光染料对处理后的精细胞进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。 9.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述精细胞顶体完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 5 viability和acrosome integrity两种荧光染料对精细胞顶体膜进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。 10.根据权利要求书5中所述的评估公猪精子质量的方法，其特征在于，所述细菌浓度的检测的步骤为：首先过滤细菌，然后使用EASYKIT 6 Bacterial concentration荧光染料进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。
所属类别：	发明专利