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原文传递一种昆虫颗粒体病毒的计数方法

专利名称：	一种昆虫颗粒体病毒的计数方法
摘要：	本发明提供了一种昆虫颗粒体病毒的计数方法，所述方法包括以下步骤：1)使用染色试剂将昆虫颗粒体病毒样品稀释2～1000倍并使其染色；2)使用脱色试剂将步骤1)染色后的样品再稀释2～1000倍并使其脱色；3)使用细菌计数板对步骤2)脱色后的样品计数，并根据公式计算昆虫颗粒体病毒的颗粒浓度。与现有技术相比，本发明提供的方法操作方便，易于判断，结果准确。不仅可以定量检测昆虫颗粒体病毒，而且可以提高检测的准确性、可靠性。本发明提供的方法操作简单，使用到的仪器简易，可以广泛地推广应用到农药生产、农业病虫害防治等领域。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院动物研究所
发明人：	张寰;冯振群;陈新中;秦启联;苗麟;孟茜;李瑄;张继红;周桂灵;王红托;方分分
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201810390398.2
公开号：	CN110412028A
代理机构：	北京泛华伟业知识产权代理有限公司
代理人：	李渤;郭广迅
分类号：	G01N21/84(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100101 北京市朝阳区北辰西路1号院5号
主权项：	1.一种昆虫颗粒体病毒的计数方法，所述方法包括以下步骤： 1)使用染色试剂将昆虫颗粒体病毒样品稀释2～1000倍并使其染色； 2)使用脱色试剂将步骤1)染色后的样品再稀释2～1000倍并使其脱色； 3)使用细菌计数板对步骤2)脱色后的样品计数，并根据公式计算昆虫颗粒体病毒的颗粒浓度。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述昆虫颗粒体病毒为小菜蛾颗粒体病毒或苹果蠹蛾颗粒体病毒。 3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，所述染色试剂选自台盼蓝、亚甲蓝伊红或考马斯亮蓝G250。 4.根据权利要求3所述的方法，其中，在步骤1)中，所述染色试剂为考马斯亮蓝G250；优选地，所述考马斯亮蓝G250的浓度为0.1～10g/L；更优选地，所述考马斯亮蓝G250的浓度为0.5～5g/L；进一步优选地，所述考马斯亮蓝G250的浓度为1g/L。 5.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤1)中，所述染色包括在95～100℃下，使用染色试剂处理昆虫颗粒体病毒样品至少5min；优选地，所述染色试剂处理时间为至少5min、至少6min、至少7min、至少8min、至少9min、至少10min；更优选地，所述染色试剂处理时间为至少10min；优选地，在步骤1)中，所述稀释倍数为2-100倍，进一步优选地为2-50倍，最优选地为10倍。 6.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，所述脱色试剂选自蒸馏水、冰醋酸或者甲醇、冰醋酸和水的混合溶液；优选地，所述脱色试剂为甲醇、冰醋酸和水的混合溶液；更优选地，所述混合溶液中甲醇、冰醋酸和水的体积比为(1～5)：(1～5)：(1～10)；进一步优选地，所述混合溶液中甲醇、冰醋酸和水的体积比为1:1：(1～10)；更进一步优选地，所述混合溶液中甲醇、冰醋酸和水的体积比为1：1：8。 7.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，所述脱色试剂稀释时间为1-10分钟。 8.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤2)中，所述脱色试剂稀释倍数为2-100倍，进一步优选地为2-50倍，最优选地为10倍。 9.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中，所述计数使用光学显微镜，优选地为相差光学显微镜。 10.根据权利要求9所述的方法，其中，在步骤3)中，所述显微镜的放大倍数为目镜4～20倍，物镜40-100倍；优选地为目镜20倍，物镜63倍。
所属类别：	发明专利