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原文传递一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法

专利名称：	一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法
摘要：	本发明涉及检测血液中白藜芦醇及其代谢物方法，具体涉及一种UPLC‑MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法。所述方法为通过连续毛细管微量采血(CMS)获取待测样品，然后对待测样品预处理后，最后通过超高效液相色谱‑串联质谱法检测白藜芦醇及其代谢物。CMS采血技术与UPLC‑MS/MS的高灵敏度相结合的整合技术，同时解决了限制小鼠药代动力学研究中样本数量少及灵敏度不高的主要问题，而且具有动物损伤少、操作简便、可靠性高的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	中南大学湘雅医院
发明人：	陈尧;许樱;郭晶;陈李杰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910724011.7
公开号：	CN110412166A
代理机构：	长沙星耀专利事务所(普通合伙)
代理人：	宁星耀
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	410008 湖南省长沙市湘雅路87号中南大学湘雅医院临床药理研究所
主权项：	1.一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述方法为通过连续毛细管微量采血获取待测样品，然后对待测样品预处理后，最后通过超高效液相色谱-串联质谱法检测白藜芦醇及其代谢物。 2.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述的代谢物为R3G和R3S。 3.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述通过连续毛细管微量采血获取待测样品具体为：步骤一、将12只6-8周龄小鼠进行称重并进行记录，体重范围22-26g，于实验前禁食不禁水12h；步骤二、白藜芦醇溶解于生理盐水中，最终浓度为15mg/mL,按照小鼠体重进行灌胃，灌胃量为10mL/kg,即150mg/kg；步骤三、用无菌棉擦拭被处理过的鼠尾，从尾巴根部轻轻挤压鼠尾至尾巴尖部，即可在尾尖处聚集血滴，用毛细管吸取血液再转移至1.5ml抗凝离心管即可，收集的样本避光保存于-80℃。 4.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述待测样品的预处理具体为：用移液器准确吸取10μl的全血于1.5ml的离心管中，加入含5.48ng/ml内标的甲醇溶液，涡旋5分钟，4℃，14000rpm离心10分钟，吸取100μl上清于另一干净的1.5ml离心管中，再加入100μl的流动相A，涡旋2分钟混匀，4℃，14000rpm离心5分钟，吸取100μl上清加入进样瓶中上机检测。 5.根据权利要求4所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述的流动相A为5mm的乙酸铵。 6.根据权利要求1所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述通过超高效液相色谱-串联质谱法检测白藜芦醇及其代谢物的方法具体为：步骤一、质谱条件的建立：在负离子条件下，质谱采用多反应监测(MRM),扫描白藜芦醇及体内代谢物R3G、R3S及内标的离子对；步骤二、液相条件的建立：自动进样器温度设置为15℃，在流动相A为5mm乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.3ml/min的条件下ACE Excel5 Super C18柱较好的分离白藜芦醇、R3G、R3S及内标的离子对。 7.根据权利要求6所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述内标为己烯雌酚。 8.根据权利要求7所述的一种UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法，其特征在于，所述己烯雌酚的纯度为99.9％。 9.一种基于权利要求1-8任一所述的UPLC-MS/MS法测定小鼠血液中白藜芦醇及其代谢物的方法在小鼠白藜芦醇及其代谢产物药代动力学评价中的用途。
所属类别：	发明专利