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原文传递能同时定量检测血液中NSE和S100B的试纸条及制备方法

专利名称：	能同时定量检测血液中NSE和S100B的试纸条及制备方法
摘要：	本发明属于医学检测技术领域，涉及一种同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫层析试纸条及制备方法。通过对试纸条的改进，首次创造性地将磁性免疫层析技术引入NSE和S100B的联合检测中，结合磁信号检测仪，可同时实现对NSE和S100B的单人份定量检测，具有快速、简便、实用、高特异性及高灵敏度的特点，显著提高了脑卒中检测的精确性，即在NSE和S100B双阳性的基础上，可进一步判断脑卒中发生率，以提高对脑卒中的发生的早期诊断率及预后监测，具有较好的临床应用意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东第一医科大学(山东省医学科学院)
发明人：	王莹;杨明峰;孙保亮;范存东;张宗勇;袁慧
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910694103.5
公开号：	CN110470833A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	张贵宾
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	271099 山东省泰安市泰山区长城路中段619号
主权项：	1.一种能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条,包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸及底板,其特征在于,所述结合垫上装载有以磁珠为标记物且分别与NSE抗体和S100B抗体偶联形成的抗NSE免疫磁珠和抗S100B免疫磁珠；所述硝酸纤维素膜上设置有包被NSE抗体和包被S100B抗体的两条检测线以及包被有兔抗鼠IgG抗体的一条质控线。 2.根据权利要求1所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条，其特征在于：所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在底板上，相邻之间相互交错重叠2mm。 3.一种制备权利要求1或2所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将磁珠经过预处理后，分别与NSE抗体和S100B抗体偶联，制备得到抗NSE免疫磁珠和抗S100B免疫磁珠；（2）将样品垫用样品垫处理液浸泡，将结合垫用结合垫处理液浸泡，烘干；（3）将步骤（1）得到的抗NSE免疫磁珠和抗S100B免疫磁珠喷涂在步骤（2）浸泡烘干过的结合垫上，烘干；（4）在硝酸纤维素膜上包被两条检测线和一条质控线，其中一条检测线包被有NSE抗体，另一条检测线包被有S100B抗体，质控线包被有兔抗鼠IgG抗体；（5）将经过步骤（2）处理后的样品垫、步骤（3）处理后的结合垫和步骤（4）处理后的硝酸纤维素膜以及吸水纸，相邻部件之间互相部分重叠，依次组装得到磁性免疫层析试纸条。 4.根据权利要求3所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，所述步骤（1）中磁珠为羧基修饰的磁性纳米磁珠，粒径为100-300nm；磁珠预处理步骤为：使用含0.05 wt% 吐温20的pH=5.0，0.01 M的四吗啉乙磺酸溶液洗涤，然后加入EDC和NHS活化，EDC、NHS与磁珠的摩尔比为2:2:1- 5:5:1，室温活化1小时；活化结束后，使用含0.05 wt%吐温20的pH=9.0，0.005 M的硼酸-硼砂溶液洗涤磁珠；磁珠与抗体的偶联步骤为：以20-40 μg抗体/mg磁珠的量分别加入NSE抗体、S100B抗体，室温保持4-6 h，然后用含0.05 wt% 吐温20及1 wt% BSA的pH=9.0，0.005 M的硼酸-硼砂溶液37 ℃封闭30 h，封闭结束后，用含0.05 wt% 吐温20、0.05 wt%叠氮化钠及1 wt%BSA的pH=9.0，0.005 M的硼酸-硼砂溶液重新分散磁珠，4 ℃保存备用。 5.根据权利要求3所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，所述步骤（2）中样品垫处理液为含2 wt% NaCl、2 wt% TritonX-100、0.5 wt%BSA及0.5 wt% PVP的0.005 M，pH为7.4-9.0的硼酸-硼砂溶液；所述的结合垫处理液是含5-10wt%蔗糖、2 wt%海藻糖、0.05 wt% TritonX-100的0.005 M，pH为7.4-9.0的硼酸-硼砂溶液。 6.根据权利要求3所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，所述步骤（3）步骤为：将制备好的抗NSE免疫磁珠和抗S100B免疫磁珠以1:1的质量比分别使用定量喷膜装置或微量移液器以30 μL/cm的量均匀涂于处理好的结合垫上，然后置于25-37℃烘箱中干燥后加入干燥剂封存备用。 7.根据权利要求3所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，所述步骤（4）步骤为：使用抗体稀释液分别将NSE抗体、S11B抗体和兔抗鼠多克隆IgG抗体的浓度调整至0.5-2 mg/mL，然后将三者用划膜仪以1 μL/cm的量以0.4 cm-1 cm的间隔均匀一致地喷印于硝酸纤维素膜上，得到两条检测线一条质控线，晾干后加入干燥剂封存备用。 8.根据权利要求7所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，NSE抗体、S100B抗体和兔抗鼠多克隆IgG抗体的浓度分别为1.5 mg/mL、1.5mg/mL和0.5 mg/mL，所述划膜仪以1 μL/cm的量将NSE抗体、S100抗体和IgG抗体以0.4 cm的间隔均匀喷印于硝酸纤维素膜上。 9.根据权利要求7所述能同时定量检测血液中NSE和S100B的磁性免疫试纸条的方法，其特征在于，所述的抗体稀释液是含有1-2 wt%蔗糖的0.01 M，pH=7.2-7.6的磷酸盐缓冲液。
所属类别：	发明专利