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原文传递一种醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量测定方法

专利名称：	一种醒脑静注射液脑组织中冰片与麝香酮含量测定方法
摘要：	本发明涉及一种脑组织中的冰片与麝香酮含量测定方法，所述方法，步骤如下：醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，用生理盐水冲洗表面，然后用滤纸滤干，使用前放置在湿冰或5±3℃条件下，取脑后60分钟内，按一倍质量的脑加入1.5倍体积的生理盐水，匀浆得到脑匀浆，每495ul脑匀浆加入500μL含内标奈的溶液和，充分涡旋，放入‑20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，在4℃，20000g离心条件下离心20分钟，取250μL上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡济民可信山禾药业股份有限公司
发明人：	甘国峰;闵江;於江华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910746665.X
公开号：	CN110470757A
代理机构：	北京华科联合专利事务所(普通合伙)
代理人：	王为;孟旭
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	214028 江苏省无锡市新区长江南路12号
主权项：	1.一种脑组织中的冰片与麝香酮含量测定方法，所述方法采用气质联用色谱法，其特征在于，所述方法，步骤如下：醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，取脑后60分钟内，加入生理盐水，匀浆得到脑匀浆，加入含萘的内标溶液，充分涡旋，放入-20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，离心，取上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，，所述方法，步骤如下：醒脑静给与哺乳动物体内，随后取脑，用生理盐水冲洗表面，然后用滤纸滤干，使用前放置在湿冰或5±3℃条件下，取脑后60分钟内，按一倍质量的脑加入1.5倍体积的生理盐水，匀浆得到脑匀浆，每495ul脑匀浆加入500μL含内标萘的溶液，充分涡旋，放入-20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，在4℃，20000g离心条件下离心20分钟，取250μL上清，过滤后，注入气质联用色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，用标准曲线法计算大鼠脑组织中冰片与麝香酮的含量；其中所述气质联用色谱仪采用以下色谱条件：气质联用色谱仪色谱系统条件：气相色谱：安捷伦7890A，色谱柱：岛津Rtx-Wax，30m，0.25 ID，0.25um(RT-12423)，程序升温条件：初始温度150℃，15℃/min升温至250℃，维持5min。进样口温度：250℃，载气：高纯氦气，流速：2mL/min，压力：19.4psi，自动进样器：安捷伦7693；自动进样器温度：室温，保留时间：待测物内标冰片＝～5.3分钟萘＝～5.6分钟麝香酮＝～9.2分钟运行时间：12.83min 进样量：1μL 质谱仪：7000QQQ-MS 离子化模式：电子电离极性：正离子监测模式：MRM 离子源温度：230℃ 碰撞气：高纯氮气 EMV：2386或2441 离子对和参数： 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述标准曲线法中的标准曲线的制备方法如下：以冰片和麝香酮作为对照品，配制成已知的不同浓度的对照品溶液，按照气质联用色谱仪色谱系统条件进行检测，得到色谱图，根据色谱图峰面积和不同对照品溶液对应的浓度，得到不同含量的冰片和麝香酮的标准曲线。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述内标溶液，是用乙酸乙酯稀释的600ng/mL萘的内标溶液。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中，冰片，麝香酮以及内标的峰面积和/或峰高由QQQ Quantitative Analysis软件获得，并用标准样品建立标准曲线。 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中，利用QQQ Quantitative Analysis软件对待测物/内标的峰面积比与待测物的浓度进行线性回归得到标准曲线。 7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中，得到色谱图后，进行数据处理，方法如下：待测样品浓度由QQQ Quantitative Analysis软件经线性方程式来确定。其他实验数据的统计分析利用Microsoft Excel软件计算。 8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括测定空白液以作为对照，所述空白液的制备方法如下：一倍质量的空白大鼠脑加入1.5倍体积的生理盐水中，匀浆得到空白脑匀浆，冷冻保存在-80±5℃的冰箱内，向已加有5μL工作溶液和空白脑匀浆的离心管中加入含内标的乙酸乙酯，充分涡旋，放入-20±5℃冰箱过夜萃取，室温融化，充分涡旋，在4℃，20000g离心条件下离心20分钟，取上清过滤即得。 9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述标准曲线用的标准溶液的制备方法如下：将冰片和麝香酮溶于无水乙醇，配制成5mg/mL的冰片和麝香酮的混合储备溶液。一份冰片和麝香酮储备液用无水乙醇进一步用稀释液稀释成1000，2,500，5,000，10,000，25,000，100,000，200,000和400,000ng/mL的标曲工作溶液。另一份冰片和麝香酮储备液用无水乙醇进一步用稀释液稀释成1,000，3,000，20,000和320,000ng/mL的定量下限、低、中、高浓度的质控样品工作溶液。 10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，内标溶液的制备方法如下：萘用无水乙醇制成10mg/mL的内标储备液，然后继续用乙酸乙酯稀释成600ng/mL的内标溶液。
所属类别：	发明专利