详情

原文传递一种五味子甲素纯度标准物质及其制备方法与应用

专利名称：	一种五味子甲素纯度标准物质及其制备方法与应用
摘要：	本发明公开了五味子甲素纯度标准物质的制备方法。制备方法包括：从五味子药材中提取制备五味子甲素纯度标准物质的候选物；候选物的纯度分析和结构鉴定；候选物的均匀性检验；候选物的稳定性检验；候选物的纯度定值检测；不确定度评定；若纯度分析、结构鉴定、均匀性检验、稳定性检验和不确定度评定均满足要求，则制得五味子甲素纯度标准物质。本发明还提供由上述方法制备得到的五味子甲素纯度标准物质及其应用。本发明的五味子甲素纯度标准物质能作为标准物质用于准确检测由五味子和南五味子作为原料生产的相关产品中五味子甲素成分含量，为实现我国准确定量五味子甲素成分含量提供了具备可溯源性和量值传递功能的标准物质资源。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海诗丹德标准技术服务有限公司
发明人：	许纪锋;潘雪格;郑丁丁;钱勇;谢天培
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910864947.X
公开号：	CN110487612A
代理机构：	上海浦一知识产权代理有限公司
代理人：	郑权
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	201203 上海市浦东新区自由贸易试验区蔡伦路720弄2号206室
主权项：	1.一种五味子甲素纯度标准物质的制备方法，其特征在于，包括： 1)从五味子药材中提取制备五味子甲素纯度标准物质的候选物； 1a.提取：将五味子药材粉碎，按质量比加入5～50倍的甲醇作为提取溶剂，于60℃至回流温度下提取1～10h，得提取液； 1b.萃取：将提取液浓缩除去提取溶剂，加入0.5～5倍体积的正己烷萃取1～3次，合并正己烷层，得萃取液； 1c.正相硅胶柱层析：将萃取液浓缩，上样，采用硅胶柱层析，用体积比正己烷：乙酸乙酯＝(5～7):1进行洗脱，合并含五味子甲素的洗脱液，浓缩，得浓缩物； 1d.结晶：将浓缩物按每克加入0.2～1L甲醇并在加热下溶解，放置后有无色晶体析出，过滤；将过滤得到的晶体再按每克加入0.2～0.5L甲醇在加热下溶解，放置重结晶，过滤，干燥，即得五味子甲素候选标准物质； 2)候选物的纯度分析和结构鉴定：确认该候选物是否是五味子甲素，确认该候选物的纯度是否不低于99.5％；如果纯度分析和结构鉴定符合要求，则进行均匀性检验； 3)候选物的均匀性检验：如果候选物均匀性满足要求，则进行稳定性检验； 4)候选物的稳定性检验：如果候选物稳定性满足要求，则进行纯度定值检测； 5)候选物的纯度定值检测： 5a.采用高效液相色谱面积归一化法测定所述五味子甲素原料中五味子甲素的质量百分含量，得出所述五味子甲素原料的纯度定值PO；测定所述五味子甲素原料中的水分质量百分含量XW、挥发性杂质质量百分含量XV和非挥发性杂质质量百分含量Xe；按照如下公式I计算，得出五味子甲素纯度标准物质的纯度定值1，记为PHPLC-AN；公式I：PHPLC-AN＝Po(1-XW-XV-Xe) 其中，PHPLC-AN为采用高效液相色谱面积归一化法测得的纯度定值1；PO为五味子甲素原料的液相色谱法定值，XW为水分质量百分含量，XV为挥发性杂质质量百分含量，Xe为非挥发性杂质质量百分含量； 5b.采用定量核磁法测定所述五味子甲素原料中五味子甲素的质量百分含量，所述定量核磁法采用内标法，内标物为尼泊金乙酯；按照如下公式II进行计算，得出五味子甲素纯度标准物质的纯度定值2，记为PNMR；公式II：PNMR＝Ix/IStd·NStd/Nx·Mx/MStd·mStd/mx·PStd，其中：PNMR为采用定量核磁法测得的被测物的纯度定值2；Ix为样品指定峰的积分面积；IStd为内标物指定峰的积分面积；NStd为内标物指定峰的核群核个数；Nx为样品指定峰的核群核个数；Mx为样品的相对分子质量；MStd为内标物的相对分子质量；mStd为添加内标物的质量；mx为样品称样量；PStd为内标物的纯度； 5c.计算所述纯度定值1和所述纯度定值2的平均值，即得五味子甲素纯度标准物质的纯度定值； 6)不确定度评定：对候选物进行不均匀性引入的不确定度、不稳定性引入的不确定度、和标准物质的定值过程引入的不确定度进行评定；若纯度分析、结构鉴定、均匀性检验、稳定性检验和不确定度评定均满足要求，则制得五味子甲素纯度标准物质。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，采用单因素方差分析法对五味子甲素纯度标准物质的候选物的均匀性检验结果进行统计分析。 3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，均匀性检验的方法为：从标准物质总体单元中抽取不少于11个包装，在相同的条件下在每个包装不同部位取三次平行，采用重量-容量法配制溶液，采用高效液相色谱-面积归一化法检验，获得的数据采用方差分析法分析；通过组间方差和组内方差的比较来判断各组测量值间有无统计差异；如两者的比值小于统计检验的临界值，则认为样品是均匀的。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，采用直线拟合法对五味子甲素纯度标准物质的候选物进行稳定性检验，所述稳定性检验包括长期稳定性和短期稳定性检验。 5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述长期稳定性检验的方法为：将五味子甲素标准物质置于4℃储存条件，分别在第0、1、3、6、9、12个月进行稳定性监测；每个时间点随机选取3～5个包装，每个包装取2～3个子样，采用重量-容量法配制溶液，以高效液相色谱法-面积归一化法进行测定；通过HPLC归一化法含量变化情况，经过t-检验对数据进行分析，评价样品的长期稳定性；t-检验的结果判断中，若\|β1\|＜t0.95，n-2·s(β1)，则稳定性检验结果为稳定。 6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述短期稳定性检验的方法为：随机选取分装好的五味子甲素纯度标准物质包装单元，置于-50℃～70℃运输条件下，分别于1、3、5、7、14天抽取3～5个包装进行检验，每个包装取2～3子样进行稳定性检测，采用重量-容量法配制溶液，以高效液相色谱法-面积归一化法进行测定；通过HPLC归一化法含量变化情况，经过t-检验对数据进行分析，评价样品的短期稳定性；t-检验的结果判断中，若\|β1\|＜t0.95，n-2·s(β1)，则稳定性检验结果为稳定。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，五味子甲素纯度标准物质的候选物中水分质量百分含量XW采用卡尔费休库伦法测定，挥发性杂质质量百分含量XV采用顶空气相色谱法测定，非挥发性杂质质量百分含量Xe采用炽灼残渣法测定。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，采用单因素方差分析进行均匀性检验，不均匀性引入的不确定度为：其中，S1为组间标准偏差；S2为组内标准偏差；SH为均匀性标准偏差；n为组内测量次数；长期稳定性引入的不确定度为：ults＝s(β1)·X，其中，s(β1)为线性斜率的标准偏差；X为给定的保存期限；短期稳定性引入的不确定度为：usts＝s(β1)·X，其中，s(β1)为线性斜率的标准偏差；X为给定的保存期限；定值过程引入的不确定度，包括：液相色谱面积归一化法定值引入的不确定度、水分测定引入的不确定度、挥发性杂质及非挥发性杂质测定引入的不确定度、定量核磁法引入的不确定度；液相色谱面积归一化法定值引入的不确定度u(PHPLC-AN)计算公式如下：其中，u(PHPLC-AN)为液相色谱面积归一化法定值的不确定度；urel(P0)为液相色谱法的相对不确定度；u(XW)为水分测定的不确定度；u(XV)为挥发性杂质测定的不确定度；u(Xe)为非挥发性杂质测定的不确定度；水分测定引入的不确定度u(XW)为水分测定的标准偏差；挥发性杂质测定的不确定度u(XV)为挥发性杂质测定的标准偏差，非挥发性杂质测定的不确定度u(Xe)为非挥发性杂质测定的标准偏差；定量核磁共振法的定量引入的不确定度计算公式如下：其中：u(Ix/IStd)为定量峰面积的不确定度；u(Mx)为五味子甲素相对分子质量的不确定度；u(MStd)为内标物尼泊金乙酯的相对分子质量的不确定度；u(mx)、u(mStd)为样品及内标物称样量的不确定度；u(PStd)为内标物的不确定度；液相色谱面积归一化法和定量核磁共振法两种不同原理方法定值引入的不确定度uchar：将均匀性检验、稳定性检验、定值检验3部分不确定度分量按照下述公式进行合成，即得五味子甲素纯度标准物质的候选物的合成标准不确定度uCRM： 9.由权利要求1-8任一项所述的方法制备得到的五味子甲素纯度标准物质。 10.如权利要求9所述的五味子甲素纯度标准物质在以下1)-5)任一项中的应用： 1)作为标准物质应用于五味子药材及以其为原料的药品及保健品中五味子甲素成分检测； 2)检测实验室质量控制； 3)作为标准物质对分析仪器校准； 4)分析方法确认评价； 5)对给定材料赋值。
所属类别：	发明专利