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一种用于区分密叶红豆杉和云南红豆杉的代谢标志物及其检测方法
| 专利名称： | 一种用于区分密叶红豆杉和云南红豆杉的代谢标志物及其检测方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种用于区分密叶红豆杉和云南红豆杉的代谢标志物及其检测方法。通过色谱结合UPLC‑MS/MS技术，大规模地对密叶红豆杉和云南红豆杉进行非靶向高通量代谢组学分析。明确了密叶红豆杉和云南红豆杉的代谢谱，筛选得到紫杉叶素乙酸酯(Taxifolin 3‑O‑acetate)为一种显著差异的小分子代谢标志物，其显著积累于密叶红豆杉中。本发明的特点是为区分密叶红豆杉和云南红豆杉提供了一种可靠、快速的鉴别方法，为濒危珍稀植物的保护和人工栽培提供了有效的分子手段。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 杭州师范大学 |
| 发明人： | 沈晨佳;俞春娜;冯尚国;罗秀俊;徐昕耘;章铖超 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-09-17T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-12T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910876537.7 |
| 公开号： | CN110441439A |
| 代理机构： | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) |
| 代理人： | 朱亚冠 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 311121浙江省杭州市余杭区仓前街道余杭塘路2318号 |
| 主权项： | 1.紫杉叶素乙酸酯作为鉴定密叶红豆杉和云南红豆杉的代谢标志物上的应用，其化学特征如下：其分子式为C17H14O8，分子量为346.3，化学结构式如下所示： 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于密叶红豆杉中紫杉叶素乙酸酯的质量含量是云南红豆杉的10-15倍。 3.如权利要求1所述的应用，其特征在于密叶红豆杉和云南红豆杉为幼苗。 4.一种区分密叶红豆杉和云南红豆杉的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤： 1)研磨后密叶红豆杉或云南红豆杉枝条样品用甲醇缓冲液提取代谢物： 将120μL预冷至-20℃的体积含量50％甲醇加入到25mg红豆杉样品，轻轻震荡1min，室温孵育10min，再置于-20℃下过夜，4000×g离心20min后，上清液于-80℃保存或干燥保存； 2)将上述提取液上清液进行LC-MS分析，最后根据紫杉叶素乙酸酯的质量含量判断，若紫杉叶素乙酸酯的质量含量高于0.15mg/g则为密叶红豆杉，反之则为云南红豆杉。 5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于LC-MS分析参数包括： 高效气相色谱条件如下： 色相系统为：SCIEX UPLC系统； 色谱柱温度为：35℃； 色谱柱为：安捷伦酸性丙烯酰胺柱(100mm*2.1mm，1.7μm,Waters，UK)； 流动相：流动相A为25mM醋酸铵+25mM氨水，流动相B为9:1的IPA:ACN的+0.1％蚁酸； 流动相梯度为：0-0.5min为95％的流动相B、0.5-9.5min为95％-65％的流动相B、9.5-10.5min为65％-40％的流动相B、10.5-12min为40％-95％的流动相B、12.2-15min为95％的流动相B； 质谱条件如下： 高分辨率质谱仪：TripleTOF5600plus型； 遮蔽气设置为30PSI，离子源Gas1为60PSI，离子源Gas2为60PSI； 加热温度为650℃； 对于正离子模式，离子喷射电压分别为5000V，对于负离子模式，离子喷雾电压浮动分别为-4500V； 质谱数据采集采用IDA模式，TOF质量范围为60-1200Da。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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