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原文传递一种基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法

专利名称：	一种基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法
摘要：	本发明公开了一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，采用橡子果实作为原料，包括以下步骤：1)提取，2)纯化，3)溶解，4)混合，5)，点样。本发明通过MALDI‑TOF MS技术，在反射模式和线性模式下对缩合单宁进行检测，分析缩合单宁的结构单元及结构单元的比例、缩合单宁中不同聚合度的聚合物分布信息，以获得完成可靠的缩合单宁MALDI‑TOF质谱信息。本发明提供的检测方法具有灵敏度高，准确率高，分辨率高、快速简便和高通量等。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津大学
发明人：	乔斌;刘文义;那平
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910261275.3
公开号：	CN110455909A
代理机构：	天津创智天诚知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王秀奎
分类号：	G01N27/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	300072天津市南开区卫津路92号
主权项：	1.一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，包括以下步骤： 1)提取：将橡子果实粉碎后经第一有机溶剂进行提取，得到缩合单宁的粗提液，蒸发除去所述缩合单宁的粗提液中的所述第一有机溶剂，得到缩合单宁的水相提取物，将所述缩合单宁的水相提取物冻干处理，得到缩合单宁粗提取物，向所述缩合单宁粗提取物当中加入第二有机溶剂，得到缩合单宁粗提取物溶液，所述第一有机溶剂和第二有机溶剂均为乙醇水溶液或丙酮水溶液，且第二有机溶剂浓度高于第一有机溶剂； 2)纯化：所述缩合单宁粗提取物溶液经纯化柱纯化处理后得到缩合单宁纯化物溶液，将所得缩合单宁纯化物溶液冻干处理，得到固体粉末为缩合单宁样品； 3)溶解：将所述缩合单宁样品溶于第三有机溶剂中，配制得到缩合单宁样品溶液，所述第三有机溶剂为50％～75％乙醇、30～75％丙酮溶液或50～70％乙腈溶液；所述缩合单宁样品溶液溶液浓度为5～20mg/mL；基质采用0.1％三氟乙酸和10％的乙腈溶液配制成饱和基质溶液，其中所述0.1％三氟乙酸的用量为所述基质重量的0.05～0.2倍，所述基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸、2，5-二羟基苯甲酸或芥酸之中的一种； 4)混合：所述缩合单宁样品溶液和所述饱和基质溶液以1：2～5的体积比充分混合，得到混合溶液； 5)点样：取1～4μL混合溶液将其滴加在基质辅助激光解吸电离仪器的靶板上，利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪对橡子中的缩合单宁进行分析。 2.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤1)中，将所述橡子果实粉碎至100～300目的颗粒，之后经第一有机溶剂进行提取，得到缩合单宁的粗提液，蒸发除去所述缩合单宁的粗提液中的所述第一有机提取溶剂，得到缩合单宁的水相提取物，将所述缩合单宁的水相提取物冻干处理，得到缩合单宁粗提取物，向所述缩合单宁粗提取物当中加入第二有机溶剂，得到缩合单宁粗提取物溶液，所述第一有机溶剂为70％乙醇溶液或70％丙酮溶液，所述第二有机溶剂为75％乙醇溶液或75％丙酮溶液。 3.根据权利要求2所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤1)中所述提取过程的提取温度为50～60℃，回流时间为1.5～3小时。 4.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤2)中，所述纯化柱为HP2MG大孔树脂或SephadexLH-20凝胶柱。 5.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤2)中，所述纯化处理采用所述缩合单宁粗提取物与所述大孔树脂的质量比1:12.5～20的比例进行吸附，用2.5倍柱体积的水进行水相洗涤，除去部分糖，水相洗涤之后用75％的乙醇洗脱，75％的乙醇洗脱液为所述缩合单宁纯化物溶液。 6.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，所述冻干处理过程为：将溶液在-20℃下冻成固体，然后在低于10Pa，温度为-70℃下的冻干机中冻干12h，得到固体粉末的过程。 7.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤3)中，所述基质为2，5-二羟基苯甲酸。 8.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤3)中，所述第三有机溶剂为50％的乙腈溶液或30％的丙酮溶液。 9.根据权利要求1所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤3)中，所述缩合单宁样品溶液溶液浓度为10mg/mL。 10.根据权利要求8所述的一种基于基质辅助激光解析串联飞行时间质谱分析橡子中缩合单宁的分析方法，其特征在于，在步骤4)中，所述缩合单宁样品溶液和所述饱和基质溶液以1：3的体积比充分混合，得到混合溶液。
所属类别：	发明专利