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原文传递趋化因子CXCL14在预测结肠癌预后中的应用

专利名称：	趋化因子CXCL14在预测结肠癌预后中的应用
摘要：	本发明公开了趋化因子CXCL14在预测结肠癌预后中的应用，包括检测趋化因子CXCL14的试剂在制备预测结直肠癌预后的工具中的应用；更具体的公开了一种通过免疫学方法定量的检测结直肠组织中CXCL14蛋白的表达量，以此来进行结肠癌预后的预测的方法。本方法对于III‑IV结直肠癌患者总生存时间的预后具有显著的预测价值，从而能有针对性的改善不良的治疗预后，提高医疗水平，提高生活质量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	成都和同易创生物科技有限公司
发明人：	黄灿华;黄琛;张涛
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910796002.9
公开号：	CN110488015A
代理机构：	重庆乐泰知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	娄淑贤
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	610041 四川省自由贸易试验区成都高新区益州大道中段888号1栋1号3楼1号
主权项：	1.一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒包括用于对待测样品进行预处理获得样本的试剂和用于对样本中CXCL14蛋白表达量进行检测的检测试剂、标签或使用说明书；所述标签或使用说明书注明所述试剂盒用于预测结直肠癌的预后。 2.根据权利要求1所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，所述待测样品为结直肠组织切片。 3.根据权利要求2所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括内源性过氧化物酶阻断剂、动物非免疫血清、抗CXCL14多克隆抗体、生物素标记的二抗、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶、DAB显色试剂和磷酸缓冲盐溶液。 4.根据权利要求3所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，对于每张临床样本组织切片，所述检测试剂的用量为内源性过氧化物酶阻断剂50ul、动物非免疫血清50ul、抗CXCL14多克隆抗体1ul、生物素标记的二抗50ul、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶50ul、DAB显色试剂100ul、磷酸缓冲盐溶液200ul。 5.一种权利要求1-4任一项所述的预测结肠癌预后的诊断试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将临床组织进行石蜡包埋后进行连续切片，厚度为2μm； (2)将切好的片子在55℃恒温烤箱中放置2h； (3)将上述干燥后的切片进行脱蜡处理； (4)将脱蜡处理后的组织切片用PBS溶液浸泡； (5)每张切片加50ul内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育20分钟； (6)PBS冲洗或浸泡3×3min； (7)每张组织切片加50ul的非免疫性动物血清封闭非特异性结合； (8)甩干血清，每张切片加稀释好的第一抗体兔源抗CXCL14多克隆抗体，4℃恒温过夜； (9)PBS冲洗或浸泡3×3min； (10)甩去PBS液，每张切片加50ul生物素标记第二抗体，室温下孵育30min； (11)PBS冲洗或浸泡3×10min； (12)甩去PBS液，每张切片加50ul链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育25min； (13)PBS冲洗或浸泡3×3min； (14)甩去PBS液，每张切片加100ul新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，看到黄染之后立即将切片浸入蒸馏水中中止染色； (15)进行苏木素复染及封片； (16)用图形处理软件计算平均吸光度值，并进行统计分析。 6.根据权利要求1-4任一项所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒还包括组织微阵列。 7.根据权利要求6所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒，其特征在于，所述组织微阵列由以下步骤制成： (1)制作模具蜡块,大小为45mm×20mm,在模具蜡块上打出间距为0.1mm,直径为0.6mm的小孔,每个小孔以坐标准确定位； (2)样本蜡块根据HE染色观察,选定并分别在HE切片和相应石蜡组织块上标记取样组织的位点,用内径0.6mm的不锈钢针进行穿刺,深度2～3mm,将其固定于模具蜡块的小孔内； (3)将模具蜡块以4μm厚度切片,敷贴于载玻片或尼龙膜等固相载体上,就制成了组织微阵列。 8.根据权利要求1-4任一项所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒在结肠组织病理检测方面的应用。 9.根据权利要求1-4任一项所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒在预测晚期结直肠癌患者总生存时间方面的应用。 10.根据权利要求1-4任一项所述的一种预测结肠癌预后的诊断试剂盒在预测结直肠癌患者术后转移复发方面的应用。
所属类别：	发明专利