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原文传递一种检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸及其制备方法

专利名称：	一种检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测禽白血病病毒的荧光微球免疫层析试纸及其制备方法，属于荧光免疫层析检测领域。本发明所述试纸由底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸组成。其中，所述样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸水平方向顺序连接粘贴在底板上。所述层析膜上包被有禽白血病病毒单克隆抗体3F6的检测T线和羊抗鼠单克隆抗体构成的质控C线；所述结合垫上含荧光微球标记的禽白血病病毒单克隆抗体5B7。本发明用于检测蛋清、血清和泄殖腔拭子样品，通过荧光检测仪读取分析结果，从而实现对样品中禽白血病病毒的定量检测。该发明具有方便快捷、操作简单、检测时间短、特异性强、灵敏度高、定量检测等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州维佰生物科技有限公司
发明人：	潘玉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910401632.1
公开号：	CN110470836A
代理机构：	广州凯东知识产权代理有限公司
代理人：	罗丹
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510000 广东省广州市黄埔区玉岩路12号实验楼三楼315-7房
主权项：	1.一种检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸，由底板、样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸组成，底板上依次连接粘贴样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸，其特征在于，所述层析膜上依次包被有禽白血病病毒单克隆抗体3F6与羊抗鼠单克隆抗体，以禽白血病病毒单克隆抗体3F6包被区域为检测T线，以羊抗鼠单克隆抗体包被区域为质控C线；所述结合垫上含有荧光微球标记的禽白血病病毒单克隆抗体5B7。 2.一种如权利要求1所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)制备一对禽白血病病毒单克隆抗体； 2)用荧光微球标记禽白血病病毒单克隆抗体5B7，保存于微球重悬液，并将其喷涂在结合垫上； 3)将禽白血病病毒单克隆抗体3F6与羊抗鼠单克隆抗体分别包被于层析膜上； 4)将样品垫、结合垫、层析膜、吸水纸依次连接粘贴在底板上，切割、组装成试纸。 3.如权利要求1-2任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸，其特征在于，所述的荧光微球内部填充镧系元素的螯合物。 4.如权利要求1-3任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸，其特征在于，所述的镧系元素为铕、钐、鈊、镝中的一种。 5.如权利要求1-2任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述包被于层析膜上的禽白血病病毒单克隆抗体3F6是使用禽白血病病毒P27蛋白免疫小鼠制备获得，由保藏编号为CCTCC NO:C2017248的杂交瘤细胞株3F6分泌产生。 6.如权利要求1-2任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的禽白血病病毒单克隆抗体5B7是禽白血病病毒P27蛋白免疫小鼠制备获得，由保藏编号为CCTCC NO:2017247的杂交瘤细胞株5B7分泌产生。 7.如权利要求1-2任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记禽白血病病毒单克隆抗体5B7的方法，包括如下步骤： 1)将荧光微球溶于100nM的磷酸二氢钠缓冲液，加入(EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)反应20分钟，使微球表面羧基基团活化； 2)置4℃下以17500rmp离心1小时后弃上清，加入50mM的MES(2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物)，以100w的功率超声重悬3次，每次工作时间3秒，间隔时间3秒； 3)加入禽白血病病毒单克隆抗体5B7，使单克隆抗体与微球表面羧基基团偶联，室温(15～25℃)震荡反应2小时； 4)加入含10％BSA(牛血清白蛋白)的磷酸盐缓冲液(浓度、稀释液和量，比如含1％牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液)，用于封闭微球上未标记单克隆抗体的羧基基团，室温(15～25℃)震荡反应10分钟； 5)置4℃下以17500rmp离心45分钟后弃上清，加入微球重悬液，以100w的功率超声重悬3次，每次工作时间3秒，间隔时间3秒，置4℃环境保存。 8.如权利要求1-2任一所述的检测禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，微球重悬液是含2％海藻糖、8％蔗糖、1％Tween-20、1％酪蛋白钠盐、2％BSA、0.05％NaN3，pH值8.5的0.2M硼酸硼砂缓冲液。 9.一种权利要求1-2任一所述的禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸在检测禽白血病病毒中的应用，包括如下步骤： 1)待测样品处理； 2)用禽白血病病毒荧光微球免疫层析试纸进行检测； 3)用荧光检测仪分析检测结果。
所属类别：	发明专利