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原文传递乙醇检测方法及试剂盒

专利名称：	乙醇检测方法及试剂盒
摘要：	本发明公开了一种乙醇检测方法及试剂盒。所述方法利用乙醇被乙醇脱氢酶氧化生成乙醛的同时氧化型辅酶I生成还原型辅酶I，产生的还原型辅酶I将铁氰化钾转化为亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与三氯化铁生成普鲁士蓝，通过测定普鲁士蓝的吸光度测定普鲁士蓝生成量，计算出乙醇含量。本发明的试剂盒由0.2～2U乙醇脱氢酶、0.2～2U NADH脱氢酶、0.2～2mM氧化型辅酶I和10～100mM铁氰化钾的混合溶液，缓冲液和10～100mM三氯化铁。本发明只需使用仅支持可见光波长的酶标仪就可以在短时间内测得液体中乙醇浓度，检测限低至0.1mM。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京理工大学
发明人：	李大力;霍俊呈;谢巧梅;任璐;秦宁纯;康荣达;汪俊松
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201810467979.1
公开号：	CN110501293A
代理机构：	南京理工大学专利中心
代理人：	刘海霞
分类号：	G01N21/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	210094 江苏省南京市孝陵卫200号
主权项：	1.乙醇检测方法，其特征在于，具体步骤如下：在待测溶液中加入pH为8.0的缓冲溶液和试剂A，混合均匀后，在37℃温育，温育结束后加入三氯化铁溶液，混合均匀后，测定波长为685～720nm的吸光度，根据乙醇浓度与吸光度的标准曲线，计算得到待测溶液中的乙醇浓度；所述的试剂A为含有0.2～2U乙醇脱氢酶、0.2～2U NADH脱氢酶、0.2～2mM氧化型辅酶I和10～100mM铁氰化钾的混合溶液。 2.根据权利要求1所述的乙醇检测方法，其特征在于，所述的缓冲溶液选自三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液或4-羟乙基哌嗪丙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液。 3.根据权利要求1所述的乙醇检测方法，其特征在于，所述的温育时间为5～30min。 4.根据权利要求1所述的乙醇检测方法，其特征在于，所述的三氯化铁浓度为10～100mM。 5.乙醇检测用的试剂盒，其特征在于，包含有0.2～2U乙醇脱氢酶、0.2～2U NADH脱氢酶、0.2～2mM氧化型辅酶I和10～100mM铁氰化钾的混合溶液，缓冲液和10～100mM三氯化铁。 6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还含有pH为8.0的缓冲溶液。 7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲溶液选自三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液或4-羟乙基哌嗪丙磺酸缓冲液或磷酸盐缓冲液。 8.根据权利要求5至7任一所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还含有5～50mM乙醇标准液，溶剂为水。
所属类别：	发明专利