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原文传递多通路结构光照明的拉曼超分辨显微成像方法

专利名称：	多通路结构光照明的拉曼超分辨显微成像方法
摘要：	多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，涉及微观粒子超分辨成像技术领域，在现有的结构光超分辨显微系统的成像光路中，加入拉曼分光成像模块，通过多种拉曼探针的选取，实现复杂体系中不同观测物的特异性成像。包括激发光模块、结构光照明模块和拉曼分光成像模块；选取特定的拉曼探针分子，将所述拉曼探针分子与抗体结合，对被测样品进行特异性标记；开启激发光模块，以倒置荧光显微镜为平台，结构光照明模块出射的光条纹激发被测样品；被激发出来探针的信号通过拉曼分光成像模块实现信号的特异性分选，然后在CCD处成像。本发明可用于内吞/转运单个分子及颗粒体系、病毒进入细胞机理、活细胞内分子的动态过程等研究方向。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	中国科学院长春应用化学研究所
发明人：	王宏达;孙佳音;初宏亮;吴强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910807953.1
公开号：	CN110501319A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	李外
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	130000 吉林省长春市朝阳区人民大街5625号
主权项：	1.多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征是；包括成像系统，所述成像系统包括激发光模块、结构光照明模块和拉曼分光成像模块；该方法由以下步骤实现：步骤一、选取特定的拉曼探针分子，将所述拉曼探针分子与抗体结合，对被测样品进行特异性标记；步骤二、开启激发光模块，以倒置荧光显微镜为平台，所述结构光照明模块出射的光条纹激发被测样品；步骤三、被激发出来探针的信号通过拉曼分光成像模块实现信号的特异性分选，然后在CCD处成像，重构获得具有二倍衍射极限的超分辨成像。 2.根据权利要求1所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于：所述激发光模块包括耦合器(1)、单模光纤(2)和不同波长的激光器；所述结构光照明模块包括准直器(3)、声光调制器(4)、扩束镜组(5)、半波片(6)、PBS分束器(7)、铁电液晶(8)、第一组透镜(9)、普克尔盒(10)、反射镜(11)、第二组透镜(12)、第一汇聚镜(13)、掩模板(14)、准直镜(15)和第二汇聚镜(16)；所述拉曼分光成像模块包括管镜(17)、载有窄带滤波片的电动转轮(18)和CCD；所述不同波长的激光器出射的激光分别经对应的二向色镜反射汇聚于耦合器(1)，经耦合器(1)耦合至单模光纤(2)；所述单模光纤(2)耦合出射的发散光束经过准直器(3)准直；再由声光调制器(4)选择不同波长的激光通过扩束镜组(5)对光束口径进行扩大；然后通过半波片(6)将光束偏振态调节为S方向后由PBS分束器(7)，将S方向的光束反射至铁电液晶(8)上，通过对铁电液晶像素的加载，将一束光衍射成多束出射；多束光依次经第一组透镜(9)、普克尔盒(10)、反射镜(11)以及第二组透镜(12)后，通过第一汇聚镜(13)到达掩模板(14)，通过掩模板(14)的±1级光束由准直镜(15)的准直以及第二汇聚镜(16)的聚焦，进入倒置荧光显微镜，最后在物镜的焦平面处实现光条纹激发被测样品；被测样品激发的拉曼信号通过管镜(17)以及由窄带滤光片滤波后在CCD相机处成像。 3.根据权利要求1所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，用于特异性标记的探针为拉曼探针或荧光探针。 4.根据权利要求1所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，被测样品包括活细胞、细胞膜、人工磷脂膜、能内吞或转运单个分子及颗粒的体系。 5.根据权利要求1所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，所述抗体为表皮生长因子受体(EGFR)抗体或葡萄糖转体蛋白(GLUT1)抗体。 6.根据权利要求2所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，激发光模块中不同波长的激光器包括出射488nm、532nm、633nm和785nm四个激发波长。 7.根据权利要求2所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，在拉曼分光成像模块中，采用具有多个孔位的电动转轮和不同中心波长的窄带滤光片对不同拉曼探针的峰值信号进行分选成像。 8.根据权利要求2所述的多通路结构光照明拉曼超分辨显微成像方法，其特征在于，所述载有窄带滤波片的电动转轮(18)设置有一空的孔位，所述空的孔位用于荧光探针标记下的传统结构光超分辨成像。
所属类别：	发明专利