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原文传递一种骨组织石蜡切片制作方法

专利名称：	一种骨组织石蜡切片制作方法
摘要：	本发明公开了一种骨组织石蜡切片制作方法，涉及石蜡切片的制作领域，方法包括：取骨组织进行固定，置于脱钙液中进行脱钙，将脱水后的骨组织置于二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液中进行透明处理，取出透明处理后的骨组织块进行浸蜡处理，并对浸蜡处理后的骨组织进行包埋直至凝固成蜡块，将蜡块切成蜡片，并进行伊红染色，将染色后的蜡片经逐级脱水和透明处理后，采用中性树胶封固。采用上述方法制作出的骨组织石蜡切片，切片显示的骨与骨周边组织形态完整、组织结构清晰、细胞形态完整、以及细胞核颗粒饱满。以此解决了现有技术中采用常规的切片制作方法制作骨组织切片时，制作时间长，制作过程中容易改变骨组织结构，并且存在染色效果不佳的技术问题。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏护理职业学院
发明人：	秦双立;秦永亭;李广智;倪杰;王士珍;张晓蕾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910921979.9
公开号：	CN110618010A
代理机构：	成都顶峰专利事务所(普通合伙)
代理人：	王霞
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	223001 江苏省淮安市淮阴区黄河西路2号
主权项：	1.一种骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤： S101，取骨组织，置于10％生理盐甲醛溶液中40～50h进行固定； S102，将骨组织从生理盐甲醛溶液中取出，取出后的骨组织通过生理盐水或清水冲洗后，置于脱钙液中进行脱钙； S103，将脱钙处理后的骨组织放入60～70％乙醇溶液中，并将骨组织依次放入体积分数为75％～85％乙醇溶液中10～15h、体积分数为95％～100％乙醇溶液中6～10h进行脱水处理，将脱水后的骨组织置于二甲苯Ⅰ、Ⅱ溶液中进行透明处理； S104，取出透明处理后的骨组织块进行浸蜡处理，并对浸蜡处理后的骨组织进行包埋直至凝固成蜡块，将蜡块切成蜡片，置于38～45℃的水浴中展开，烘干所述蜡片； S105，将烘干后的蜡片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各8～15min，并将脱蜡后的所述蜡片经无水乙醇、85～95％乙醇逐级复水至65～70％乙醇，每级1～3min，将逐级复水后的蜡片置于蒸馏水2～5min，在蒸馏水中取出蜡片并进行伊红染色8～10min；将染色后的蜡片经逐级脱水和透明处理后，采用中性树胶封固。 2.根据权利要求1所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述脱钙液为甲酸、盐酸、以及六水氯化铝与蒸馏水的混合物。 3.根据权利要求2所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述脱钙液为：85～90％甲酸4～5ml、浓盐酸7～10ml、以及六水氯化铝5～10ml均匀混合后加入蒸馏水定容至100ml的混合物。 4.根据权利要求3所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，在步骤S103中“将脱钙后的骨组织放入60～70％乙醇溶液中进行脱水”之前还包括：通过碱中和脱钙后处理后的骨组织残余的脱钙液，并通过流水进行冲洗。 5.根据权利要求1所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述逐级脱水和透明步骤具体包括：将染色后的蜡片经65～75％乙醇，80～85％乙醇，90～95％乙醇Ⅰ、Ⅱ、以及无水乙醇逐级脱水1～3min，将经过逐级脱水的蜡片置入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明5min。 6.根据权利要求1所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，步骤S104中“将蜡块切成蜡片”具体包括：将蜡块切成厚度为5～8um的蜡片。 7.根据权利要求1至6任一项所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，步骤S103中“取出透明处理后的骨组织块进行浸蜡处理”具体包括：将骨组织块置于预浸液内4～5h，再置于已融化的混合蜡液中浸蜡4～6h；其中，所述预浸液为正丁醇和石蜡混合溶液，所述混合蜡为石蜡和蜜蜡的混合物。 8.根据权利要求7所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述预浸液为正丁醇和石蜡按体积1:2混合的混合溶液。 9.根据权利要求7所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述混合蜡为石蜡和蜜蜡按80～90％：10～20％的配比的混合物。 10.根据权利要求8所述的骨组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，所述混合蜡为石蜡和蜜蜡按80～90％：10～20％的配比的混合物的熔点为58°～60°。
所属类别：	发明专利