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原文传递基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开一种基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒及其制备方法。该检测试剂盒包括以光子晶体为基底、ZIKV为抗原的Ru(bpy)32+‑COOH标记的三明治型夹心ZIKV电化学发光免疫传感器。其制备方法包括如下步骤：制备表面连接有ZIKV一抗的光子晶体薄膜，并封闭其非特异性结合位点；制备Ru(bpy)32+‑COOH标记的ZIKV二抗；将光子晶体薄膜表明连接的ZIKV一抗及Ru(bpy)32+‑COOH标记的ZIKV二抗分别与ZIKV抗原连接。本发明的寨卡病毒检测试剂盒采用ZIKV电化学发光免疫传感器，为寨卡病毒检测提供了新思路，可简便、快速地检测出寨卡病毒的浓度，而且，通过光子晶体增强电化学发光的效果，增强了电化学发光探针检测信号，提高了电化学发光免疫传感器的检测的灵敏性，降低了最低检测浓度和检测限。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东南大学
发明人：	丁收年;朱凯迪;陆天;赵春芹;徐来弟;王晓燕;杜凤峦;张慧君;李真真
专利状态：	有效
申请日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910950933.X
公开号：	CN110632060A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	吴飞
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	211189 江苏省南京市江宁区东南大学路2号
主权项：	1.一种基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒，其特征在于，包括ZIKV电化学发光免疫传感器，该ZIKV电化学发光免疫传感器为以光子晶体为基底、以ZIKV为抗原的Ru(bpy)32+-COOH标记的三明治型夹心免疫传感器。 2.根据权利要求1所述的基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒，其特征在于，所述ZIKV电化学发光免疫传感器包括表面连接有ZIKV一抗的光子晶体薄膜、Ru(bpy)32+-COOH标记的ZIKV二抗、以及通过抗原-抗体间的相互作用与两者分别连接的ZIKV抗原；其中，表面连接有ZIKV一抗的光子晶体薄膜表面的非特异性结合位点被封闭。 3.根据权利要求1所述的基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒，其特征在于，所述光子晶体薄膜为SiO2蛋白石光子晶体薄膜，ZIKV抗原为ZIKV核蛋白抗原，ZIKV一抗、ZIKV二抗为单克隆抗体。 4.权利要求1所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，制备表面连接有ZIKV一抗的光子晶体薄膜，并封闭其非特异性结合位点；步骤2，制备Ru(bpy)32+-COOH标记的ZIKV二抗；步骤3，将光子晶体薄膜表面连接的ZIKV一抗、Ru(bpy)32+-COOH标记的ZIKV二抗与ZIKV抗原连接。 5.根据权利要求4所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤1中，先将表面修饰光子晶体薄膜的氧化铟锡电极在含有3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙腈溶液中浸泡，得到氨基化的光子晶体薄膜，然后通过共价连接使ZIKV一抗连接在氨基化的光子晶体薄膜上，最后用牛血清蛋白封闭其非特异性结合位点。 6.根据权利要求4所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述光子晶体薄膜为SiO2蛋白石光子晶体薄膜，其制备步骤为： (1)合成SiO2微球 i)将体积比1:6的正硅酸乙酯与无水乙醇混合，超声得到均匀的正硅酸乙酯溶液； ii)将氨水、无水乙醇和水混合，搅拌均匀； iii)将步骤i)所得正硅酸乙酯溶液加入到步骤ii)所得溶液中，混合后溶液中正硅酸乙酯、无水乙醇、水的体积比为1:12:2，正硅酸乙酯与氨水的体积比为5:3～10:9，搅拌反应2～5h，反应结束后，离心洗涤，干燥，即得SiO2微球； (2)垂直沉积自组装法合成蛋白石光子晶体薄膜将制得的SiO2微球分散在无水乙醇中，得到质量分数1～3％的SiO2微球乳液，在50～70℃的温度条件下，采用垂直沉积自组装技术，将SiO2微球乳液沉积在基底上形成规整的蛋白石光子晶体薄膜。 7.根据权利要求4所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤2中，先将Ru(bpy)32+-COOH表面的羧基活化，然后将ZIKV的二抗与表面羧基被活化的Ru(bpy)32+-COOH反应，得到Ru(bpy)32+-COOH标记的ZIKV二抗。 8.根据权利要求7所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化Ru(bpy)32+-COOH表面的羧基。 9.根据权利要求4所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述Ru(bpy)32+-COOH的制备步骤为： (1)将摩尔比1:1的顺式-二氯二(2,2’-联吡啶)钌(Ⅱ)和2,2’-联吡啶-4,4’-二羧酸溶于甲醇和去离子水的混合液中，加入NaHCO3，于75～85℃下缓慢回流8～12h； (2)将上述溶液冷却至室温，用浓硫酸调节溶液pH至3～4.4，然后将溶液置于黑暗环境中、在冰水浴中冷却； (3)真空过滤上述冷溶液混合物，向滤液中加入现配制的NaPF6溶液，搅拌反应，然后在冰水浴中冷却； (4)离心收集沉淀，冷冻干燥褐红色沉淀物，获得结晶产物，即为Ru(bpy)32+-COOH。 10.根据权利要求4所述基于光子晶体增强电化学发光的寨卡病毒检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤3中，先将含有ZIKV抗原的PBS缓冲液与步骤1制得的表面连接有ZIKV一抗的光子晶体在35～37℃下孵育1～2h，用PBS缓冲液冲洗除去未特异性结合的ZIKV抗原；然后将其与步骤2制备的Ru(bpy)32+-COOH标记的ZIKV二抗在35～37℃下孵育1～2h，用PBS缓冲液冲洗，得到ZIKV电化学发光免疫传感器。
所属类别：	发明专利