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原文传递一种绿脓杆菌胶体金检测卡及检测方法

专利名称：	一种绿脓杆菌胶体金检测卡及检测方法
摘要：	本发明属于传染病检测领域，涉及一种绿脓杆菌胶体金检测卡及检测方法。本发明所述的胶体金检测卡包括试纸条以及检测卡外壳，所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫；所述硝酸纤维素膜粘结在所述底板的中部；所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫，另一端粘贴有吸水纸，所述结合垫上粘贴有样品垫；所述试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中，检测卡外壳上设有加样窗口和检测结果显示窗口，样品垫位于加样窗口，硝酸纤维素膜位于检测结果显示窗口。本发明所述的一种绿脓杆菌胶体金检测卡能够快速检测绿脓杆菌，且具有灵敏度高、特异性强的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东朗源生物科技有限公司
发明人：	甄俊杰;吴靖华;龚俊宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910518821.7
公开号：	CN110632299A
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	528313 广东省佛山市顺德区陈村镇赤花居委会广隆工业园兴业4路18号顺联机械城22座三层308房
主权项：	1.一种绿脓杆菌胶体金检测卡包括试纸条以及检测卡外壳，所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫；其特征在于，所述硝酸纤维素膜粘结在所述底板的中部；所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫，另一端粘贴有吸水纸，所述结合垫上粘贴有样品垫；所述试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中，检测卡外壳上设有加样窗口和检测结果显示窗口，样品垫位于加样窗口，硝酸纤维素膜位于检测结果显示窗口。 2.一种根据权利要求1所述的胶体金检测卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线，所述测试线上喷洒有捕获探针，所述控制线上喷洒有生物素化兔多克隆抗体；所述测试线位于靠近结合垫一侧，所述控制线位于靠近吸水纸一侧。 3.一种根据权利要求1所述的胶体金检测卡，其特征在于，所述结合垫上固定胶体金标记的链霉亲和素，所述结合垫上纳米金颗粒直径为15-20nm。 4.一种根据权利要求1所述的胶体金检测卡，其特征在于，所述样品垫是按照如下方法制备的：将玻璃纤维浸泡在含有 1% BSA、2% Triton、2% PEG4000、20 mM Tris-Ac和50mMNaAc的溶液中，晾干后，4℃储存备用。 5.一种根据权利要求1所述的胶体金检测卡，其特征在于，所述捕获探针是与reporter单链报告分子互补的单链DNA。 6.一种根据权利要求1所述的胶体金检测卡的检测方法，其特征在于，其操作步骤如下：将绿脓杆菌的靶DNA或者整个细胞经LAMP方法进行扩增和Cas12a体系检测后，所得溶液作为检测样品，滴加到权利要求1所述胶体金检测卡的加样窗口上，5分钟内，用肉眼观察结果或者用便携式胶体金读卡仪读取结果；所述LAMP方法为：将绿脓杆菌的靶DNA或者整个细胞加入反应体系（四条引物F3，B3，FIB，FIP，dNTP，MgSO4；1×等温放大缓冲液），在95℃条件下加热5min后，冷却，再加入8UBst DNA聚合酶，在65℃保温15-30min，然后在80℃的条件下加热10min，终止反应，得到扩增产物；所述Cas12a体系检测方法为：将LbaCas12a-crRNA activator混合物（12 µL 1×分裂缓冲液 (150 mM KCl，10 mM MgCl2，1 % glycerol，0.5 mM DTT，20 nM HEPES (pH 7.5))，3 µL crRNA (300 nM)，1µL LbaCas12a (36 nM) 和 5 µL activator (40 nM)）在37℃条件下反应30min后，加入2 µL生物素化 reporter (20 nM)和2 µL所述LAMP扩增产物，均匀混合后，在37 ℃条件下反应15min，然后98℃条件下加热2min后，终止反应。
所属类别：	发明专利