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原文传递基于质谱的磷脂酰胆碱中sn异构体的解析方法及其用途

专利名称：	基于质谱的磷脂酰胆碱中sn异构体的解析方法及其用途
摘要：	本发明公开了基于质谱的磷脂酰胆碱中sn异构体的解析方法及其用途。其中，解析方法包括：配制含有碳酸氢盐的脂质样品溶液，以得到脂质碳酸氢根加合物；对脂质样品/脂质碳酸氢根加合物进行质谱分析，以确定脂质样品中磷脂酰胆碱的碳原子总数与不饱和度；对脂质碳酸氢根加合物进行串联质谱分析，以使磷脂酰胆碱碳酸氢根加合物在低能量碰撞下引发自由基诱导的碎裂，使位于sn‑2位置的脂肪酸链断裂并形成与sn‑1位置相关的离子sn‑1 fragment，从而确定磷脂酰胆碱中两条脂肪酸链的组成和sn位置。该方法可结合液相色谱对含有磷脂酰胆碱的脂质样品进行高通量分析，简单高效，无需对现有仪器进行改造即可实现高灵敏、高通量和高精细的结构解析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	清华大学
发明人：	瑕瑜;赵雪
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910898854.9
公开号：	CN110632222A
代理机构：	北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	肖阳
分类号：	G01N30/72(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100084 北京市海淀区清华园
主权项：	1.一种基于质谱的磷脂酰胆碱中sn异构体的解析方法，其特征在于，包括： (1)配制含有碳酸氢盐的脂质样品溶液，以便得到脂质碳酸氢根加合物，其中，所述脂质样品中具有磷脂酰胆碱； (2)对所述脂质样品/所述脂质碳酸氢根加合物进行质谱分析，以便确定脂质样品中磷脂酰胆碱的碳原子总数与不饱和度； (3)对所述脂质碳酸氢根加合物进行串联质谱分析，以便使磷脂酰胆碱碳酸氢根加合物在低能量碰撞下引发自由基诱导的碎裂，使位于sn-2位置的脂肪酸链断裂并形成与sn-1位置相关的离子sn-1fragment，从而确定所述磷脂酰胆碱中两条脂肪酸链的组成和sn位置，其中，所述sn-1fragment的结构式如式(I)所示，R1为脂肪酸链， 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述低能量碰撞使用的碰撞能量为30±5eV，优选30±2eV。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，进一步包括：将所述串联质谱分析与PB反应或环氧化反应联用，以便确定特定sn位置的脂肪酸链中碳碳双键的位置。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述脂质样品为含有胆碱磷酸头部基团的脂质和/或经衍生化反应后形成的含有胆碱磷酸头部基团的脂质。 5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，进一步包括：根据不同质核比的“sn-1fragment”百分比对所述磷脂酰胆碱sn异构体的相对含量进行分析；引入内标并建立sn异构体标准品的定量曲线，以便对所述磷脂酰胆碱sn异构体进行绝对定量分析。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述质谱分析的进样方式为鸟枪法、直接进样法或液相色谱-质谱联用法。 7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述质谱分析采用的仪器为三重四级杆质谱仪或beam-type CID质谱仪。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述脂质样品为磷脂酰胆碱标准品或含有磷脂酰胆碱的复杂生物样品。 9.权利要求1-8中任一项所述的方法在疾病样品脂质生物标志物筛查中的用途。 10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述脂质生物标志物具有磷脂酰胆碱的sn位置异构体，或具有磷脂酰胆碱的sn位置异构体和特定sn位置的脂肪酸链的C＝C位置异构体，任选地，所述疾病样品包括乳腺癌组织样品和阿尔兹海默症血液样品，用于所述乳腺癌组织的脂质生物标志物的磷脂酰胆碱为选自“PC 16:0_17:0”、“PC 15:0_18:1”、“PC 16:0_17:1”和“PC 16:0_18:1”中的至少一种。
所属类别：	发明专利