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原文传递一种用于粮食或饲料中玉米赤霉烯酮检测的电化学传感器制备方法

专利名称：	一种用于粮食或饲料中玉米赤霉烯酮检测的电化学传感器制备方法
摘要：	本发明涉及霉菌毒素玉米赤霉烯酮检测的电化学传感器的制备方法及应用，属于电化学检测技术领域。其特征在于：首先合成得到Cu@L‑Glu纳米材料，然后将钯铂双金属纳米粒子固载在Cu@L‑Glu纳米材料上，再使信号探针与该复合材料混合，制得生物信号探针；然后通过Au‑PANI‑Au用于玉米赤霉烯酮适配体AP的固载，从而制备了玉米赤霉烯酮检测的电化学传感器，该传感器具有用于食品和饲料中玉米赤霉烯酮检测的潜力。本发明的优点在于灵敏度高，特异性强，检测迅速，方便。本发明为玉米赤霉烯酮污染检测技术的研发提供实验依据，为食品和饲料中玉米赤霉烯酮污染的监测提供新思路和新技术平台。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	重庆医科大学
发明人：	何俊琳;于超;吉星多
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910030897.5
公开号：	CN109696462A
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	400016 重庆市渝中区医学院路1号
主权项：	1.一种用于粮食或饲料中玉米赤霉烯酮检测的电化学传感器制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1)铜鳌合谷氨酸有机配位聚合物(Cu@Glu)-双金属钯铂(Pd-Pt NPs)-CP检测探针的制备； (2)建立电化学生物传感器，测定玉米赤霉烯酮，绘制标准曲线。 2.根据权利要求1所述Cu@L-Glu/Pd-PtNPs-CP复合物的制备过程，其特征包括以下步骤： (1)Cu@L-Glu纳米材料的制备：首先，将10mg CuCl2·2H2O和10mg L-Glu分散在5mL磷酸盐缓冲盐水(PBS，0.1M，pH8.0)中，同时以300rpm搅拌12小时。随后，通过离心纯化所得溶液，并用超纯水洗涤三次，然后分散在1mL超纯水中以供进一步使用。 (2)Pd-Pt NPs纳米复合材料的制备：首先将90μl H2PtCl6(5％)和119μl Na2PdCl4(5％)加入到10mL超纯水中。然后将10mLNaBH4溶液(0.28mg/mL)缓慢加入到复合溶液中，同时以400rpm搅拌1小时。之后，将混合物溶液以14,000rpm离心并用超纯水和乙醇重复洗涤三次。将最终制剂分散在2mL超纯水中以供进一步使用。 (3)Cu@L-Glu/Pd-PtNPs纳米复合材料的制备：将50μl的Cu@L-Glu溶液溶解在2mlPd-Pt NPs溶液中中并在300rpm下连续搅拌12小时来制备Cu@L-Glu/Pt-PdNP的纳米复合材料。随后，将制备的黑色溶液以6000rpm离心3分钟并用超纯水洗涤三次，并将所得的CuL-Glu/Pd-PtNP分散在1mL超纯水中以供进一步使用。 (4)Cu@L-Glu/Pd-PtNPs-CP复合物的制备：首先将标记了巯基的Complementary DNA在使用前，在室温下在黑暗中放置2小时从而还原其二硫键。随后，将1mL制备的CuL-Glu/Pd-PtNP与200μl，4μM硫醇修饰的CP混合，并在4℃温和搅拌12小时。随后，将CuL-Glu/Pd-PtNPs-CP生物缀合物以8000rpm离心5分钟并用杂交溶液洗涤，然后将获得的CuL-Glu/Pd-PtNPs-CP生物缀合物分散在1mL杂交溶液中。 3.根据权利要求1所述的建立电化学生物传感器，测定玉米赤霉烯酮浓度，绘制标准曲线，其特征在于包括以下步骤： (1)分别用0.3和0.05μm的Al2O3粉末将电极抛光成镜面，然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声电极各5min，室温干燥备用； (2)将10μL电极修饰材料金-聚苯胺-金(Au-PANI-Au)滴加在电极表面，室温干燥。 (3)将10μL，2μM的AP滴加在干燥后的电极表面(37℃，1.5h)。 (4)用超纯水将电极冲洗干净后滴加10μL，0.25mM的MCH溶液室温孵育30min。 (5)将上述MCH封闭后的电极冲洗干净后滴加10μL的Cu@L-Glu/Pd-PtNPs-CP复合物，37℃孵育2h。 (6)用超纯水将电极冲洗干净后，将不同浓度的玉米赤霉烯酮滴加在电极上并置于37℃孵育2h。 (7)将孵育后的电极用清洗缓冲液冲洗干净后置于氮气中干燥。 (8)将电极置于5mL，0.1M PBS(0.1M Na2HPO4x0.1M KH2PO4，0.1M KCl)中进行表征，每隔50s加入20μL，2.2M H2O2，测量其计时电流变化电流值。 (9)根据所得电流变化值与玉米赤霉烯酮浓度呈线性关系，绘制工作曲线。
所属类别：	发明专利