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原文传递一种测定微囊藻毒素浓度的方法

专利名称：	一种测定微囊藻毒素浓度的方法
摘要：	本发明提供了一种测定微囊藻毒素浓度的方法，基于二硫化钼量子点可以与金纳米颗粒通过内滤效应发生作用，然而微囊藻毒素可以影响其适配体修饰的金纳米颗粒在高盐溶液中的聚散程度，实现了水环境中微囊藻毒素浓度的检测。本发明中使用的二硫化钼的上转换荧光能够有效地避免水环境中背景基质荧光的干扰，光学稳定性好，检测结果准确可靠，成本低廉，操作简单，绿色环保，检测专一性好，避免其它常见金属离子或阴离子对微囊藻毒素的测定的影响，抗干扰能力强，且结果灵敏可靠，检测限低，响应速度快，整个反应过程只需要20min，大大的提高了检测效率，稳定性好，能够实现实时在线的快速、专一性检测，可以用于实际水环境微囊藻毒素的简单快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	长江师范学院
发明人：	曹海燕;石文兵;董文飞;陈果
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910156297.3
公开号：	CN109696430A
代理机构：	重庆博凯知识产权代理有限公司
代理人：	张先芸
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	408100 重庆市涪陵区聚贤大道16号
主权项：	1.一种测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，具体包括以下步骤： 1）二硫化钼量子点原液的制备：取四水钼酸铵、N-乙酰基-L-半胱氨酸和硫脲加入水中并在冰浴下充分混合，得到混合溶液，再将所述混合溶液转移至水热反应釜中加热反应后，自然冷却，然后将其离心分离取上清液，即得到二硫化钼量子点原液；所述四水钼酸铵、N-乙酰基-L-半胱氨酸和硫脲的质量比为3.16:1:0.39； 2）绘制标准曲线：取微囊藻毒素核酸适配体溶液、硼氢化钠还原的金纳米溶液和可溶盐，混合均匀得到混合溶液，再将一系列浓度梯度的微囊藻毒素标准溶液分别加入所述混合溶液中得到反应液，充分反应15min后，再加入步骤1）得到的二硫化钼量子点原液混合反应，然后用超纯水定容至相同体积，取定容后的溶液在激发波长862 nm，发射波长505 nm处测定荧光强度，以微囊藻毒素浓度为横坐标，相对荧光强度（I-I0）/I0为纵坐标绘制标准曲线；其中，I0为微囊藻毒素浓度为零时，二硫化钼量子点的荧光强度，I为二硫化钼量子点与不同浓度微囊藻毒素共同存在时对应的荧光强度；所述微囊藻毒素核酸适配体的5´端修饰了巯基；所述金纳米修饰了柠檬酸； 3）待测样品检测：将待测样品加入步骤2）所述的混合溶液中，并按照步骤2）所述方法检测待测样品的荧光强度；将所得荧光强度数值带入步骤2）获得的标准曲线中，再通过计算即得到待测样本中的微囊藻毒素浓度。 2.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述混合溶液中四水钼酸铵与水的质量体积比为1g：64.7 mL。 3.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述反应釜的反应温度为180~220℃，反应时间为3~6h。 4.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述离心转速为18000 ~ 25000 r/min，时间为8~15 min。 5.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述微囊藻毒素适配体核苷酸序列如下所示： 5’-SH-GGCGCCAAACAGGACCACCATGACAATTACCCATACCACCTCATTATGCCCCATCTCCGC -3’。 6.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述微囊藻毒素核酸适配体溶液、硼氢化钠还原的金纳米溶液和微囊藻毒素标准溶液的摩尔比为1:0.1~0.2:0~0.04。 7.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述反应液中可溶盐的浓度为1~7 mM。 8.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述可溶盐为NaCl、KCl、MgCl2、K2SO4或KNO3。 9.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述标准曲线回归方程为y =0.0246 + 0.0616x（0.05-1.00 μg L-1），R = 0.9868；y =0.0909 + 0.0073x（1.00-40.00 μg L-1），R = 0.9954，其中，y为（I-I0）/I0，x为微囊藻毒素浓度，单位为μg L-1，R为相关系数。 10.根据权利要求1所述测定微囊藻毒素浓度的方法，其特征在于，所述方法测定微囊藻毒素的浓度范围为0.1~40 μg L-1。
所属类别：	发明专利