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原文传递人类耳祖细胞鉴定和分离

专利名称：	人类耳祖细胞鉴定和分离
摘要：	本发明主要涉及人耳祖细胞的鉴定和分离。更具体地，本发明涉及使用细胞标志物从混合细胞群中鉴定和分离人耳祖细胞的方法、富集和产生人耳祖细胞的方法以及用于鉴定和/或分离人耳祖细胞的相关试剂盒，其中细胞标志物选自SSEA1(CD15)、二唾液酸神经节苷脂GD3、TRA‑2‑49(肝/骨/肾碱性磷酸酶)、SSEA4、神经节苷脂GD2和CD141。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	英国;GB
申请人：	谢菲尔德大学
发明人：	卡洛斯·马塞洛·尼古拉斯·里沃尔塔;萨拉·路易丝·博迪
专利状态：	有效
申请日期：	2017-09-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201780056911.8
公开号：	CN109716133A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	刘明海;宁涛
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	英国南约克郡
主权项：	1.一种鉴定混合细胞群中的人耳祖细胞的方法，其包括确定细胞是否具有至少两种选自以下的细胞表面标志物：SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141。 2.根据权利要求1所述的方法，其中细胞标志物SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4和GD2是阳性细胞标志物。 3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中细胞标志物CD141是阴性细胞标志物。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其中组合使用至少两种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。 5.根据权利要求2或3所述的方法，其中组合使用至少三种、四种或五种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。 6.根据任意前述权利要求所述的方法，其中一种阳性细胞标志物，或至少两种阳性细胞标志物与阴性细胞标志物CD141组合使用。 7.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述混合细胞群由体外多能干细胞分化方案提供或在其期间提供，所述体外多能干细胞例如人胚胎干细胞(hESC)或诱导多能干细胞(iPSC)；或者其中所述混合细胞群由去分化、反式分化或直接重编程成人耳细胞谱系提供或在其期间提供；或者其中所述混合细胞群由组织提供，所述组织例如发育中的胎儿内耳组织，或从成人内耳的外科手术干预获得的耳蜗或前庭样品。 8.根据任意前述权利要求所述的方法，其中人耳祖细胞的鉴定在体内进行。 9.根据任意前述权利要求所述的方法，其中使所述混合细胞群与一个或多个被布置成与细胞标志物结合的结合成员接触。 10.根据权利要求9所述的方法，其中结合成员包括抗体、抗体片段或其模拟物。 11.根据任意前述权利要求所述的方法，其包括检测步骤，其中检测所述细胞标志物是否存在于细胞或细胞群上。 12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述结合成员带有标记用于鉴定。 13.根据权利要求12所述的方法，其中所述标记包含荧光团。 14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中检测包括使用FACS和/或使用MACS。 15.一种鉴定混合细胞群中的人耳祖细胞的方法，其使用至少两种选自以下的细胞表面标志物：SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141，所述方法包括： -提供对至少两种不同细胞标志物特异的结合成员； -将混合细胞群与结合成员接触；和 -检测结合成员与混合细胞群中的细胞的结合或非结合。 16.根据权利要求15所述的方法，其中所述方法还包括：如果符合下列情况，则确定细胞是人耳祖细胞： a)被布置成与阳性细胞标志物结合的结合成员与细胞上的至少两种不同的阳性细胞标志物结合；或者 b)被布置成与阳性细胞标志物中的一种结合的结合成员与细胞上的至少一种阳性细胞标志物结合，并且被布置为与阴性细胞标志物CD141结合的结合标志物不与细胞结合。 17.根据权利要求15所述的方法，其中所述方法还包括：如果符合下列情况，则确定细胞是人耳祖细胞： a)被布置成与阳性细胞标志物结合的结合成员与细胞上的至少三种不同的阳性细胞标志物结合；或者 b)被布置成与至少两种不同的阳性细胞标志物结合的结合成员与细胞上的至少两种不同的阳性细胞标志物结合，并且被布置为与阴性细胞标志物CD141结合的结合标志物不与细胞结合。 18.一种从混合细胞群中富集人耳祖细胞的方法，所述方法包括： -根据权利要求1-17中任一项所述的方法鉴定人耳祖细胞；和 -分选细胞，使得人耳祖细胞从非耳祖细胞中分离出来，使人耳祖细胞在群中富集。 19.根据权利要求18所述的方法，其中分选包括FACS和/或包括MACS。 20.一种产生人耳祖细胞群的方法，所述方法包括： -将非耳祖细胞分化为人耳祖细胞，由此一些非耳祖细胞可能保留在群中以形成混合细胞群；以及 -根据权利要求18或19所述的方法从混合细胞群中富集人耳祖细胞。 21.一种试剂盒，其包含至少两种不同结合成员，其中所述结合成员被布置成与选自SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141的不同细胞标志物结合。 22.根据权利要求21所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含至少三种不同结合成员，其中所述结合成员被布置成与选自SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141的不同细胞标志物结合。 23.根据权利要求21或22所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一组结合成员，其中所述结合成员组包含对SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141的每种细胞标志物特异的结合成员。 24.根据权利要求21至23中任一项所述的试剂盒，其中所述结合成员是抗体，并且任选地其中所述抗体带有标记。 25.CD141作为阴性细胞标志物用于鉴定混合细胞群中的非耳祖细胞的用途。
所属类别：	发明专利