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原文传递一种GPR120电化学受体传感器及其制备方法和应用

专利名称：	一种GPR120电化学受体传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种GPR120电化学受体传感器及其制备方法和应用，旨在提供一种灵敏度高，能快速定量测定的传感器及其制备方法和应用。该方法为：在玻碳电极表面添加壳聚糖溶液形成壳聚糖膜层；置于纳米金溶胶中自组装；表面滴加GPR120受体蛋白溶液4℃自组装；滴加硫堇‑壳聚糖复合物溶液于电极表面，室温下晾干；纳米金‑辣根过氧化物酶溶液中4℃自组装；于GPR120受体蛋白溶液中4℃自组装；封闭非特异性位点，即得本发明的传感器。该方法将GPR120受体蛋白自组装到生物传感器上，利用电化学信号放大系统模拟胞内受体信号级联放大过程，直观地检测其与不同脂肪酸配体的相互作用关系，灵敏度高，有利于受配体相互作用的研究。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津商业大学
发明人：	庞广昌;鲁丁强;许秋达
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910154710.2
公开号：	CN109709179A
代理机构：	天津市三利专利商标代理有限公司
代理人：	肖莉丽
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	300134 天津市北辰区津霸公路东口
主权项：	1.一种GPR120电化学受体传感器，其特征在于，包括基底玻碳电极，所述基底玻碳电极的表面从内向外依次设置有壳聚糖膜层、纳米金溶胶层、第一GPR120受体检测层、硫堇-壳聚糖复合物膜层、纳米金-辣根过氧化物膜层、第二GPR120受体检测层和封闭层。 2.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，包括下述步骤： (1)在玻碳电极表面添加壳聚糖溶液，干燥，使玻碳电极表面形成壳聚糖膜；之后，使用低浓度NaOH中和膜表面的醋酸，之后用超纯水洗掉壳聚糖膜表面残留的NaOH离子晾干，形成壳聚糖膜层； (2)置于纳米金溶胶中自组装，生成纳米金溶胶层； (3)电极表面滴加GPR120受体蛋白溶液4℃自组装，生成第一GPR120受体检测层； (4)滴加硫堇-壳聚糖复合物溶液于电极表面的中心，室温下晾干，生成硫堇-壳聚糖复合物膜层； (5)将电极置于纳米金-辣根过氧化物酶溶液中4℃自组装，生成纳米金-辣根过氧化物膜层； (6)于GPR120受体蛋白溶液中4℃自组装，生成第二GPR120受体检测层； (7)滴涂BSA溶液，于37℃孵育，封闭非特异性位点，即得GPR120电化学受体传感器。 3.根据权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，所述GPR120受体蛋白溶液通过下述方法制备： ①合成pcDNA3.0-GPR120重组质粒；②将上述得到的重组质粒转化入Top10甘油菌感受态细胞，通过氨苄青霉素培养基筛选挑取阳性克隆菌株，将上述菌株置于LB液体培养基中置于恒温摇床中进行扩大培养，然后提取质粒；③对提取的质粒进行抽提；④HEK-293T细胞质粒转染；⑤蛋白提取得到带有His标签的GPR120受体蛋白溶液。 4.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，所述玻碳电极的峰电位差为64-80mV。 5.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的纳米金溶胶的光吸收峰的波长λmax为515-525nm；颗粒呈球形，粒径为18-20nm。 6.根据权利要求2所述的GPR120电化学受体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述纳米金/辣根过氧化物酶溶液采用下述方法制备：用0.1mol/L K2CO3调节所述纳米金溶胶的pH值至7.0后，将所述纳米金溶胶与2.0g/L辣根过氧化物酶溶液按照体积比为1：1的比例搅拌混匀即可得到纳米金/辣根过氧化物酶溶液。 7.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器在用于多种脂肪酸测定方面的应用。 8.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器用于测定脂肪酸浓度的方法，其特征在于，包括下述步骤： Ⅰ、采用三电极工作系统，将组装好的GPR120电化学受体传感器电极作为工作电极，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以超纯水作为空白对照，采用时间-电流法在一定的电压下测定不同浓度的脂肪酸溶液与该受体的响应电流，以响应电流的变化率作为检测指标，计算响应电流的变化率的公式为：式中：△I％表示响应电流的变化率；I1：表示分析物被测定前的稳态电流值；I2：表示分析物被测定后同一时间点的稳态电流值； Ⅱ、以不同脂肪酸溶液浓度的倒数为横轴，以响应电流的变化率的倒数为纵轴作图，得到拟合的线性回归方程：式中：C为脂肪酸溶液物质量浓度； Ⅲ、根据拟合的线性回归方程，计算得到脂肪酸溶液的浓度。 9.一种权利要求1所述的GPR120电化学受体传感器用于确定不同脂肪酸的激活常数的方法，其特征在于，所述激活常数定义为达到受体饱和最大生物学效应一半时的配体浓度，该方法包括下述步骤： Ⅰ、采用三电极工作系统，将组装好的GPR120电化学受体传感器电极作为工作电极，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以超纯水作为空白对照，采用时间-电流法在一定的电压下测定不同浓度的脂肪酸溶液与该受体的响应电流，以响应电流的变化率作为检测指标，计算响应电流的变化率的公式为：式中：△I％表示响应电流的变化率；I1：表示分析物被测定前的稳态电流值；I2：表示同一时间点分析物被测定后的稳态电流值； Ⅱ、以不同脂肪酸溶液浓度的倒数为横轴，以响应电流的变化率的倒数为纵轴作图，得到拟合的线性回归方程：式中：C为脂肪酸溶液物质量浓度； Ⅲ、根据拟合的线性回归方程，计算脂肪酸溶液的激活常数Kd，Kd＝a/b。
所属类别：	发明专利