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原文传递基于纸层析的树木雌雄鉴别方法

专利名称：	基于纸层析的树木雌雄鉴别方法
摘要：	本发明公开基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，包括如下步骤：(1)蛋白提取；(2)点样；(3)层析：选用20％‑30％的乙醇溶液作为抑雄扬雌层析液；(4)染色；(5)雌雄鉴别。本发明方法简单、结果可靠、鉴别成本低廉且便于推广应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	新疆;65
申请人：	塔里木大学
发明人：	赵利峰;秦少伟;罗生杰;王汝鲜;王元康;王硕;李永乐;李娇娇
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811568244.4
公开号：	CN109724976A
代理机构：	北京冠榆知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	朱亚琦;魏振柯
分类号：	G01N21/84(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	843300 新疆维吾尔自治区阿拉尔市虹桥南路705号塔里木大学
主权项：	1.基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)蛋白提取； (2)点样； (3)层析：选用体积分数为20％-30％的乙醇溶液作为抑雄扬雌层析液； (4)染色； (5)雌雄鉴别。 2.根据权利要求1所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(1)中：在秋天叶子已经变黄时，取下叶片洗净，称取叶片，剪碎后加入蒸馏水迅速冰浴研磨成匀浆，得到的匀浆用纱布过滤，然后用离心管收集滤液。 3.根据权利要求2所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(1)中：在秋天叶子已经变黄时，取下叶片洗净后，称取0.5g叶片，剪碎后加入2mL蒸馏水迅速冰浴研磨成匀浆，得到的匀浆用纱布过滤，然后用5mL离心管收集滤液。 4.根据权利要求2所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(2)中：在滤纸条底部划点样线，将收集的滤液用移液器轻点到点样线上，待样品印记稍干即可层析。 5.根据权利要求4所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(2)中：在距离滤纸条底部1cm处划点样线，将收集的滤液用移液器轻点到点样线上，点样10-15uL，待样品印记稍干即可层析。 6.根据权利要求4所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(3)中：将抑雄扬雌层析液倒入培养皿中，液面刚好蔓延完培养皿底部，将滤纸条竖直插入培养皿中，点样线不能触碰到液面，然后用胶布竖直固定滤纸条，开始层析；等待60-90min后，当层析水线超过滤纸条的一半以上后即可取出染色。 7.根据权利要求6所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(4)中：配制醋酸-联苯胺染液，将其倒入喷壶中，均匀喷涂在水平放置的滤纸条上，待POD同工酶显色；5-10min后滤纸上出现蓝色印迹开始观察。 8.根据权利要求7所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(4)中：醋酸-联苯胺染液配制方法如下：称取1g联苯胺，先用18mL温热的冰醋酸溶解，再加入2mL蒸馏水，完全溶解后室温储存即为染色液母液。使用时取0.5mL母液，加入9.3mL蒸馏水，加入0.2mL、3wt％的H2O2溶液，混匀。 9.根据权利要求7所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，在步骤(5)中：如果蓝色印迹呈现偏细长的纵向条带则为雌性树，如果蓝色印迹呈横向条带或条带很弱则为雄性树。 10.根据权利要求1-9任一所述的基于纸层析的树木雌雄鉴别方法，其特征在于，树木为胡杨或其它含有POD同工酶的树木。
所属类别：	发明专利