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原文传递黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法

专利名称：	黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法
摘要：	一种黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法，黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，包括：酶标板、黄曲霉毒素B1标准品溶液、黄曲霉毒素B1抗体工作液、酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液；所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲溶液；所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液；所述酶标板包被有黄曲霉毒素B1包被抗原；所述黄曲霉毒素B1包被抗原通过黄曲霉毒素B1抗原与牛血清白蛋白偶联得到。相对于传统的检测方法，上述试剂盒的检测方法，检测过程及样品处理过程都相对较为简单，检测过程和操作都较为便捷。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	国家食品安全风险评估中心
发明人：	骆鹏杰;赵云峰;陈霞;王紫菲;陈银辉;李敬光;周爽
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811607127.4
公开号：	CN109725143A
代理机构：	北京华进京联知识产权代理有限公司
代理人：	黎艳
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100022 北京市朝阳区广渠路37号院2号楼
主权项：	1.一种黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括：酶标板、黄曲霉毒素B1标准品溶液、黄曲霉毒素B1抗体工作液、酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液；其中，所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液；所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液；所述浓缩稀释液为磷酸盐缓冲液；所述浓缩洗涤液包括磷酸盐吐温缓冲液；所述酶标板包被有黄曲霉毒素B1包被抗原；所述黄曲霉毒素B1包被抗原通过黄曲霉毒素B1抗原与牛血清白蛋白偶联得到。 2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述浓缩稀释液为10倍浓缩稀释液，用于稀释十倍时使用。 3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为10倍浓缩洗涤液，用于稀释十倍时使用。 4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1抗体工作液通过采用黄曲霉毒素B1包被抗原作为免疫原制备得到单克隆抗体，用抗体稀释液稀释成1：10000比例制备得到。 5.根据权利要求4所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗工作液通过羊抗鼠抗体加抗体稀释液按1：2000稀释制备得到。 6.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1抗原的制备方法包括如下步骤：将黄曲霉毒素B1与羧甲基羟氨半盐酸盐置于吡啶中，室温避光搅拌反应24小时，得到第一反应液；将所述第一反应液冷冻干燥，得到固体干燥物；将固体干燥物用纯水溶解后，并用盐酸调节pH为3.0，用乙酸乙酯抽提沉淀物，真空干燥后得到黄曲霉毒素B1肟；将黄曲霉毒素B1肟溶解于KOH的吡啶溶液中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，在70～80℃的温度下反应12小时，得到第二反应液；向第二反应液中加入N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌反应2小时，得到第三反应液。 7.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，将所述第三反应液冷冻干燥即得到黄曲霉毒素B1抗原。 8.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1包被抗原的制备方法包括如下步骤：将阳离子牛血清白蛋白用蒸馏水溶解后，加入至第三反应液中，避光室温搅拌下反应24小时，得到第四反应液；将第四反应液在0.01摩尔/升的磷酸盐缓冲液中透析3天，将透析液冷冻干燥得到黄曲霉毒素B1包被抗原。 9.根据权利要求8所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述阳离子牛血清白蛋白为牛血清白蛋白与乙二胺联结得到。 10.一种黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，采用如权利要求1至9任一项中所述的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒进行检测。
所属类别：	发明专利