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一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法
| 专利名称： | 一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法，其方法如下：（1）预处理制得林蛙卵粉，（2）选用超临界CO2萃取方法进行林蛙卵雌二醇的萃取。本发明使萃取过程充分接触，萃取率高，不添加任何其他成分，雌二醇纯度高、质量好。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏维赛科技生物发展有限公司 |
| 发明人： | 洪霞;张淑雅;杜霞 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-10-30T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-07T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711035900.X |
| 公开号： | CN109725147A |
| 分类号： | G01N33/531(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 212009 江苏省镇江市新区丁卯国家科技园B11栋3楼 |
| 主权项： | 1.一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法，其特征在于： （1）预处理 试验原料为长白山新鲜林蛙卵，经干燥粉碎处理后备用； （2）超临界CO2萃取 准确称取 4550 g干燥粉碎后的林蛙卵粉装入料筒，将料筒装入萃取缸，装上料筒O型圈再放入通气环，盖好压环及上堵头，进行萃取试验；在林蛙卵雌二醇萃取过程中选取萃取压力 15、20、25、30、35MPa，萃取温度37、42、47、52、57℃，CO2流量 8、10、12、14、16 kg/h和萃取时间 30、60、90、120、150 min，以林蛙卵雌二醇的萃取得率为考察指标，进行单因素试验；雌二醇萃取得率按下列公式计算：得率=（提取物质量/林蛙卵粉质量）×100 %； （3）酶联免疫分析（ELISA）检测超临界CO2萃取林蛙卵中雌二醇的含量 ELISA 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中林蛙雌二醇（E2）水平；用纯化的林蛙雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再与HRP 标记的雌二醇（E2）抗体结合，形成抗体—抗原—酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色；TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色；颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关；用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中林蛙卵雌二醇（E2）含量；在酶标包被板上设标准孔10孔，依次稀释后各孔加样量都为50μL，浓度分别为 48、32、16、8、4 ng/L；以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，得到标准曲线为： y=（-1.8198）+25.48401x，R2 = 0.9991；将样品的 OD 值代入方程，计算出样品的浓度，再乘以稀释倍数得到超临界萃取林蛙卵中雌二醇的含量为38.11 ng/L。 2.如权利要求1所述的一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法，其特征为： 最佳萃取条件为萃取压力30 MPa，萃取温度47℃，CO2流量为12 kg/h，萃取时间为90min。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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