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原文传递直接免疫层析检测方法、试纸条及检测大肠杆菌的应用

专利名称：	直接免疫层析检测方法、试纸条及检测大肠杆菌的应用
摘要：	本发明公开了直接免疫层析检测方法、试纸条及检测大肠杆菌的应用，基于革兰氏染色原理，结晶紫先将细菌染为蓝紫色，然后由于毛细管作用，被染色的细菌沿着硝酸纤维素膜迁移，基于抗原抗体特异性结合原理，被T线的抗体捕获，使T线显示可见的强烈的蓝紫色。只需将细菌进行简单的染色就可得到明亮的蓝紫色，而不使用任何纳米材料标记抗体，免去了复杂的标记过程。该发明只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，打破了传统同时采用两种抗体的夹心检测方法，大大节省了成本，解决了配对抗体的困难，更简单、方便、新颖。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	西北农林科技大学
发明人：	王建龙;王宗汉;张道宏;张文涛;姚晓琳;窦磊娜;赵兵欣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910004522.1
公开号：	CN109738638A
代理机构：	西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：	孙雅静
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
主权项：	1.一种直接免疫层析检测方法，其特征在于，包括用结晶紫将待检测样品中的大肠杆菌进行染色得到待检液，再通过大肠杆菌单克隆抗体捕获待检液中的染色后的大肠杆菌；所述的结晶紫为结晶紫溶液，结晶紫溶液的质量百分浓度为0.01％～0.03％，大肠杆菌单克隆抗体的用量为1～1.5mg/mL。 2.如权利要求1所述的直接免疫层析检测方法，其特征在于，结晶紫将待检测样品中的大肠杆菌进行染色的染色时间至少为1分钟，大肠杆菌单克隆抗体捕获待检液中的染色后的大肠杆菌的捕获时间为10～15分钟。 3.一种直接免疫层析检测方法的试纸条，其特征在于，该试纸条采用权利要求1或2所述的大肠杆菌的检测方法进行检测。 4.如权利要求3所述的直接免疫层析检测方法的试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线包被有大肠杆菌单克隆抗体，试纸条无质控线。 5.如权利要求3所述的直接免疫层析检测方法的试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括衬板，衬板上贴有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫，硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫，硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线；检测线包被有大肠杆菌单克隆抗体，结合垫及样品垫分别经封闭液封闭处理。 6.如权利要求4或5所述的直接免疫层析检测方法的试纸条，其特征在于，检测线包被有大肠杆菌单克隆抗体的制备方法包括：大肠杆菌单克隆抗体溶于包被液配制成1mg/mL的抗体包被溶液，将抗体包被溶液以1μL/cm的速度包被于距硝酸纤维素膜的检测线上。 7.如权利要求6所述的直接免疫层析检测方法的试纸条，其特征在于，所述的包被液为：0.02g叠氮化钠、0.8g氯化钠、0.29g十二水磷酸氢二钠、0.02g氯化钾和磷酸二氢钾0.02g加水定容至100mL即得。 8.权利要求1-2所述的直接免疫层析检测方法用于检测饮用水中大肠杆菌的应用。 9.权利要求3-7所述的直接免疫层析检测方法的试纸条用于检测饮用水中大肠杆菌的应用。
所属类别：	发明专利