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原文传递一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒

专利名称：	一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒
摘要：	一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，包括包被CSFV重组蛋白E0‑1的抗体检测板、以及含辣根过氧化物酶标记的重组蛋白E0‑2和重组蛋白E0‑3的酶标标记物，这些重组蛋白是根据GenBank中CSFV的基因序列合成CSFV E0基因，构建成pFastBac‑E0重组质粒后转染、培养、表达并纯化得到。本试剂盒用于猪瘟E0抗体的检测，从而与猪瘟E2亚单位疫苗抗体进行区分，实现野毒抗体的鉴别诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南农业大学
发明人：	葛猛;余兴龙;任杰;李润成;郑金;赵墩;丁彦彬
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910096689.5
公开号：	CN109738639A
代理机构：	长沙正奇专利事务所有限责任公司
代理人：	何为;袁颖华
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
主权项：	1.一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括包被CSFV重组蛋白E0-1的抗体检测板、以及由酶标记的重组蛋白E0-2和酶标记的重组蛋白E0-3混合的酶标标记物；其中，该CSFV重组蛋白E0-1是根据GenBank中CSFV的基因序列合成CSFV E0基因，并将其克隆至pFastBac1载体，构建pFastBac-E0-1重组质粒，pFastBac-E0-1重组质粒表达的重组蛋白E0-1的基因序列如SEQ ID No:1所示；将pFastBac-E0-1重组质粒转化至感受态大肠杆菌内，生成重组杆粒；转染重组杆粒DNA至Sf9昆虫细胞系中，生成重组杆状病毒；再将重组杆状病毒继续接种Sf9细胞培养2代，将获得的重组病毒再接种到High Five细胞，表达并纯化得到；该重组蛋白E0-2和重组蛋白E0-3是根据GenBank中CSFV的基因序列合成CSFV E0基因，将能够与亲和素发生特异性结合的多肽基因及两个连续的赖氨酸基因分别插入CSFV E0基因5’端和3’端并克隆至pFastBac1载体，构建pFastBac-E0-2重组质粒和pFastBac-E0-3重组质粒，分别表达对应基因序列如SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示的重组E0-2蛋白和重组E0-3蛋白；将pFastBac-E0-2重组质粒和pFastBac-E0-3重组质粒分别转化至感受态大肠杆菌内，生成重组杆粒；转染重组杆粒DNA至Sf9昆虫细胞系中，生成重组杆状病毒；将两个重组杆状病毒分别继续接种Sf9细胞培养2代，将获得的重组病毒再接种到High Five细胞，表达并纯化得到重组蛋白E0-2和重组蛋白E0-3。 2.如权利要求1所述的一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗涤液、稀释液、底物显色液、终止液以及猪瘟抗体阴、阳性对照血清。 3.如权利要求1或2所述的一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述CSFV重组蛋白E0-1的包被浓度为1.5μg/mL。 4.如权利要求1或2所述的一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标标记物中酶标记的重组蛋白E0-2和酶标记的重组蛋白E0-3是等体积混合，重组蛋白E0-2和重组蛋白E0-3的摩尔浓度均为1.4×10-7mol/L。 5.如权利要求1或2所述的一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标记的重组蛋白E0-2是由其含有的多肽基因与辣根过氧化物酶标记的亲和素因亲和作用相结合而得到。 6.如权利要求1或2所述的一种检测猪瘟病毒E0蛋白抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标记的重组蛋白E0-3是将重组蛋白E0-3按化学偶联法偶联辣根过氧化物酶得到。
所属类别：	发明专利