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一种检测抗肾小球基底膜抗体的方法
| 专利名称： | 一种检测抗肾小球基底膜抗体的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种检测抗肾小球基底膜抗体的方法，包括如下步骤：先纯化处理抗肾小球基底膜抗原；然后，将纯化后的抗原置于前处理液中；接着，用包被缓冲液稀释抗肾小球基底膜抗原后加入酶标板中，至于适宜环境中孵化然后洗板；再加入封闭液，然后至于适宜温度下封闭0.5‑4h小时，然后洗板；然后，将酶标抗体进行稀释后，与待检血清进行稀释后加入孔内；最后加入显色液，然后每孔加入终止液终止反应。本发明提供的方法证明抗肾小球基底膜抗体经过纯化处理后，再用前处理液处理，测试结果显示诊断的灵敏度和特异性均显著提升。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 镇江金太医学检验实验室有限公司 |
| 发明人： | 陆上苏 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-12-29T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-10T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811643156.6 |
| 公开号： | CN109738649A |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 212016 江苏省镇江市宗泽路60号恺源信息中心10楼 |
| 主权项： | 1.一种检测抗肾小球基底膜抗体的方法，包括如下步骤： 抗原纯化：纯化处理抗肾小球基底膜抗原，将纯化后的抗原置于PH=6.0-7.2的缓冲溶液中，在适宜环境中静置30分钟以上，获取纯化后的抗原； 抗原前处理：将步骤a中纯化后的抗原置于前处理液中，将其置于适宜的温度中处理至少两小时； 抗原包被：用包被缓冲液稀释抗肾小球基底膜抗原至1-10ug/ml，以每孔50-100ul加入酶标板中，至于适宜环境中孵化至少30分钟，然后洗板； 封闭：以每孔150-200μL的量加入封闭液，然后至于适宜温度下封闭0.5-4h小时，然后洗板； 酶标抗体：将酶标抗体进行稀释后，与待检血清进行1 ∶10-20稀释后，每孔加入50-100μL，在适宜温度下静置，然后洗板； 显色：每孔加入显色液，然后每孔加入终止液终止反应。 2.根据权利要求1所述的检测抗肾小球基底膜抗体的方法，其特征在于：所述前处理液由以下按重量份数配比组成：磷酸氢二钠1-5份、牛血清白蛋白2-8份、吐温-20 1.5-4份、苯磺酰胺1-6份、柠檬酸钠15-26份。 3.根据权利要求2所述的检测抗肾小球基底膜抗体的方法，其特征在于：所述前处理液由以下按重量份数配比组成：磷酸氢二钠3份、牛血清白蛋白6份、吐温-20 3份、苯磺酰胺4份、柠檬酸钠20份。 4.根据权利要求1所述的检测抗肾小球基底膜抗体的方法，其特征在于：所述包被缓冲液选自50mM pH=9.6的碳酸盐缓冲液、20mM，pH =8.5的Tris-HCl缓冲液或者10mMpH =7.2的PBS缓冲液。 5.根据权利要求4所述的检测抗肾小球基底膜抗体的方法，其特征在于：所述包被缓冲液选自由Na2CO3 和NaHCO3 配置而成的50mM pH=9.6的碳酸盐缓冲液。 6.根据权利要求1所述的检测抗肾小球基底膜抗体的方法，其特征在于：所述抗肾小球基底膜抗原可以是纯化的天然抗原、重组抗原、人工合成多肽或小分子化合物。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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