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原文传递检测果蔬中邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法

专利名称：	检测果蔬中邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明公开了一种检测邻苯基苯酚的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。所述检测邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、邻苯基苯酚标准品、邻苯基苯酚的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测邻苯基苯酚的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	镇江华维检测技术有限公司
发明人：	杜霞;洪霞;秦悦
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201711073738.0
公开号：	CN109752522A
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212009 江苏省镇江市新区丁卯经十五路99号11幢
主权项：	1.一种检测邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：由多孔包被板，缓冲液，邻苯基苯酚标准品，邻苯基苯酚的抗体冻干品，铕标记的羊抗鼠抗体，洗涤液和增强液所组成。 2.一种根据权利要求1所述检测邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理，其特征在于：将邻苯基苯酚与牛血清白蛋白偶联，得到免疫原；将邻苯基苯酚与卵血清蛋白偶联，得到包被原；用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗邻苯基苯酚的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗邻苯基苯酚的单克隆抗体用步骤(2)的包被原包被固相载体；将动物组织先经过酸解提取后，再过MAX柱净化，最后加入衍生试剂和催化剂进行处理，得到待测产物；将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的邻苯基苯酚含量。 3.根据权利要求1所述检测邻苯基苯酚的时间荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的固相载体是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。 4.根据权利要求1所述检测邻苯基苯酚的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的衍生试剂是丁胺。 5.根据权利要求1所述检测邻苯基苯酚的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。 6.根据权利要求1所述检测邻苯基苯酚的时间荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤(6)和(7)具体为取包被有邻苯基苯酚-OVA的微孔包被板，加入50 µL处理好的样品到各自的微孔中，加入50 µL以缓冲液稀释的邻苯基苯酚抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗三次，加以缓冲液稀释的100 µL Eu3+-羊抗鼠抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗六次，加200 µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的邻苯基苯酚含量。
所属类别：	发明专利