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原文传递抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法

专利名称：	抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法
摘要：	本发明属于肠病检测技术领域，公开了一种抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，实验动物与分组；模型制备及药物干扰；标本收集与处理；统计分析。本发明首次通过抗MIF单抗实现对TLR4/NF‑κB信号通路过度激活的信号通路过度激活的阻断，深入分析抗阻断和抗MIF单抗对MIF、NF‑κB及TNF‑α、IL‑6等下游促炎因子的影响，确定抗MIF单抗的阻断效应及对溃疡性结肠炎保护作用；单抗的阻断效应及对溃疡性结肠炎保护作用；从UC中细胞因子网格体系的微观层面出发，确定中细胞因子网格体系的微观层面出发，确定NF‑κB因子在UC炎症因子中的枢纽作用及其与MIF、TNF‑α、IL‑6的关联。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区南溪山医院
发明人：	张启芳;邓燕贤;张海莲;郑奕;邱小芬;王柏涛
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201811597296.4
公开号：	CN109752559A
代理机构：	重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	包晓静
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	541002 广西壮族自治区桂林市象山区崇信路46号
主权项：	1.一种抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型，其特征在于，所述抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型为： SPF级雄性BALB/c小鼠40只，适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组、生理盐水组，每组10只；正常对照组自由饮水，其余三组每日饮用5％DSS溶液连续7d；抗MIF单抗4mg/mL与生理盐水1:3体积比稀释后，抗MIF单抗干预组与生理盐水组于1、2、4、6d，分别腹腔注射抗MIF单抗和生理盐水0.2mL/只/天；造模及给药期间，观察并记录各组小鼠体重变化、精神状态、毛色、粪便性状。 2.一种利用权利要求1所述抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，具有包括以下步骤：步骤一：实验动物与分组：SPF级雄性BALB/c小鼠40只，适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组、生理盐水组，每组10只；步骤二：模型制备及进行药物干扰，造模及给药期间，观察并记录各组小鼠体重变化、精神状态、毛色、粪便性状等一般情况，并根据Cooper的经典评分方法，进行疾病活动指数(DiseaseActivity Index，DAI)评分；步骤三：对标本进行收集与处理，小鼠眼球取血采用ELISA检测MIF、TNF-a、IL-6；暴露结肠，对结肠进行大体损伤评分；镜下观察，高倍镜下选取3个不重叠视野，以胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，计数各视野阳性细胞率；步骤四：统计分析，所得数据资料均以(mean±SD)形式表示，采用SPSS18.0软件进行比较分析，多组间均数的比较采用单因素方差分析(One-wayANOVA)。 3.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，小鼠的鼠龄8～9周，体质量周，体质量(24±2)g。 4.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤二中，模型制备与药物干扰，具体为：正常对照组自由饮水，其余三组每日饮用5％DSS溶液连续7d；抗MIF单抗(4mg/mL)与生理盐水1:3体积比稀释后，抗MIF单抗干预组与生理盐水组于1、2、4、6d，分别腹腔注射抗MIF单抗和生理盐水0.2mL/只/天。 5.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，标本收集，具体包括： (1)第8天断颈处死小鼠，小鼠眼球取血，离心取上清后于负80℃保存待测，采用ELISA检测MIF、TNF-a、IL-6； (2)暴露结肠，截取盲肠末端至肛门的整个肠段，沿肠系膜纵轴切开，预冷生理盐水冲洗后，滤纸吸干，对结肠进行大体损伤评分。 6.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，标本处理，具体包括： (1)一部分，置于冻存管液氮速冻后于负80℃保存，用于real time PCR检测NF-κB； (2)另一部分，分别行HE染色镜下观察各组小鼠结肠组织病理改变并行组织学损伤评分； (3)免疫组化染色镜下观察MIF、TNF-α、IL-6、NF-κB、IκB等促炎因子的表达水平。 7.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤四中，组间两两比较采用t检验；p<0.05认为有显著性差异。
所属类别：	发明专利