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原文传递一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法

专利名称：	一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法
摘要：	本发明公开一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，包括如下步骤：(1)样品前处理；(2)样品提取、浓缩；(3)样品检测；(4)用峰面积法进行定量计算。本发明自制一种带有固相萃取功能的提取装置，该装置可在密闭条件下对样品进行分离提纯、浓缩，本发明无需像传统的分离提纯、浓缩需要多次转移、浓缩的操作步骤，大大提高了提取效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	云南;53
申请人：	云南中烟工业有限责任公司
发明人：	刘欣;高茜;杨叶昆;李雪梅;杨光宇;李晶;黄海涛;许永;孔维松;米其利;王晋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910028000.5
公开号：	CN109781876A
代理机构：	北京市领专知识产权代理有限公司
代理人：	任文娟
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	650231 云南省昆明市五华区红锦路367号
主权项：	1.一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)标准溶液的配制：准确称取0.1g的苯并[a]芘于100mL容量瓶中，用乙腈定容至浓度为1.0mg/mL标准储备液，并逐级稀释标准储备液得到6级标准工作溶液，分别为：10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL、80.0ng/mL、120.0ng/mL、200.0ng/mL，通过HPLC分析，以标样峰面积(A)与浓度(C)进行线性回归，得到线性回归方程； (2)样品前处理：准确量取吸烟者尿液样品10～30mL于50mL锥形瓶中，用0.2mol/L的HCl将尿液样品的pH调节到5，并加入0.5mol/L的醋酸缓冲液(pH 5.0)1.25～3.75mL；随后再加入60μL的β-葡糖甘酸酶/芳基硫酸酯酶，在37℃的振荡水浴锅中酶解8～12h，将酶解液浓缩至干，加入1.0～3.0g的硅胶并与尿液样品充分研磨均匀，烘干； (3)样品提取、浓缩：将步骤(2)处理好的样品置于本发明自制的提取净化装置中，冷凝回流、浓缩； (4)样品检测：用乙腈溶解步骤(3)浓缩后的残留物，并过滤至色谱瓶中，利用HPLC进行检测； (5)采用峰面积法进行定量计算，通过样品中苯并[a]芘的峰面积代入线性回归方程计算，即可确定吸烟者尿液样品中的苯并[a]芘含量。 2.根据权利要求1所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，步骤(3)中的HPLC的检测条件为：色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1×50mm，1.7μm)；柱温40℃；流动相为：乙腈/水的体积比68/32，流速为0.5mL/min；采用荧光检测器FID，程序波长检测，0～6.5min：激发波长365nm，发射波长450nm；6.5～12.0min：激发波长384nm，发射波长406nm。 3.根据权利要求2所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，步骤(3)中自制的提取净化装置的结构如下：烧瓶(1)，烧瓶(1)上设有第一接口(3)、第二接口(4)和螺纹接口(2)，烧瓶(1)通过第一接口(3)与隔热导气管(5)气流导通连接，隔热导气管(5)另一端与三通转接管(7)气流导通连接，三通转接管(7)的另外两个接口分别与密闭冷凝管(10)和样品筒(8)气流导通连接，密闭冷凝管(10)上设有泄压阀(11)，样品筒(8)远离三通转接管(7)的一端设有筛板(12)并与固相萃取柱(9)气流导通连接，固相萃取柱(9)的另一端通过溶剂回流管(6)与第二接口(4)气流导通连接，溶剂回流管(6)内设有三通阀(13)。 4.根据权利要求3所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，螺纹接口(2)与色谱进样瓶可拆卸连接。 5.根据权利要求4所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，样品筒(8)和固相萃取柱(9)为耐有机溶剂腐蚀的塑料材质。 6.根据权利要求1所述的利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测吸烟者尿液中苯并[a]芘的方法，其特征在于，步骤(2)中的提取试剂为己烷-乙醇的混合溶剂，其体积比为98:2。
所属类别：	发明专利