详情

原文传递一种基于[Ru(bpy)3]2+/Au@NiFe MOFs的免疫传感器的制备方法

专利名称：	一种基于[Ru(bpy)3]2+/Au@NiFe MOFs的免疫传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种基于新型纳米多孔材料Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs的竞争型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学发光传感器领域，首次以纳米复合材料Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs为电化学发光信号源，利用氨基功能化的介孔二氧化硅MSN优良的生物兼容性和大的比表面积增加抗体的固载量，根据不同浓度抗原引起的电化学发光信号强度的不同，实现对β‑淀粉样蛋白的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	赵冠辉;曹伟;王耀光;李小建;东雪;苗俊聪;魏琴
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201811578269.2
公开号：	CN109799229A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	高强
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs的竞争型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，步骤如下：（1）介孔二氧化硅MSN的制备将0.5 mL ~ 1.5 mL、1 mol/L的氢氧化钠溶液加入30 mL超纯水80 ℃搅拌20 min，加入3 mg ~ 5 mg十六烷基三甲基溴化铵，继续搅拌30 min，降至室温，加入2 mL ~ 3 mL硅酸四乙酯，搅拌4 h，继续加入500 μL ~1 mL硅酸四乙酯和乙醇1：10的混合溶液搅拌4 h，离心分离悬浮物，使用盐酸和甲醇1:1混合液洗涤3次，乙醇洗涤2次，35 ℃真空干燥，得到白色固体介孔二氧化硅；将30 mg ~ 50 mg介孔二氧化硅分散在50 mL无水乙醇，加入200 μL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃ ~ 90 ℃回流12 h，超纯水洗涤，35 ℃真空干燥，得到氨基功能化的介孔二氧化硅MSN；（2）Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs的制备将140 mg ~ 160 mg六水合氯化镍和260 mg ~ 280 mg二水合柠檬酸三钠分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，同样将130 mg ~ 150 mg的铁氰化钾分散于20 mL超纯水中磁力搅拌5 min，然后将两种溶液混合继续在室温下搅拌8 h ~ 12 h，离心分离悬浮物，使用超纯水和乙醇分别洗涤2次，35 ℃真空干燥，得到土黄色纳米多孔NiFe MOFs；将30 mg ~ 50 mg纳米多孔NiFe MOFs分散在50 mL超纯水中，加入1 mL ~ 3 mL、1% ~3%的氯金酸溶液，室温下搅拌5 min，加入4 mg ~ 6 mg聚乙烯吡咯烷酮抑制金纳米粒子的团聚，然后加入70 mg ~ 90 mg还原剂柠檬酸三钠，0.5 mg ~ 1 mg硼氢化钠室温下搅拌8 h~ 12 h，溶液慢慢变成紫黑色，离心分离悬浮物，超纯水洗涤至上清液无色，35 ℃真空干燥12 h，得到紫黑色固体Au@NiFe MOFs；将40 mg ~ 60 mg纳米多孔Au@NiFe MOFs分散在30 mL超纯水中，加入6 mg ~ 10 mg三联吡啶氯化钌六水合物，室温下搅拌8 h ~ 12 h，由于Au纳米粒子和NiFe MOFs表面都带有大量负电荷可以和发光体Ru(bpy)32+阳离子通过静电吸附结合而形成稳定的Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs复合物，离心分离悬浮物，超纯水洗涤至上清液无色，35 ℃真空干燥12 h，得到红棕色固体Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs；（3）Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs标记β-淀粉样蛋白孵化物溶液的制备将6 mg ~ 10 mg的Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs分散于1 mL pH = 7.5的PBS中，加入4 μL~ 6 μL、6 mg/mL的Aβ，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h ~ 24 h，4 ℃离心分离洗去未结合Aβ，然后加入1 mL 0.1%的牛血清白蛋白溶液4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化2 h ~ 4h封闭Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs表面的非特异性活性位点，4 ℃离心分离洗去未结合的牛血清白蛋白，最后分散于pH 7.5的PBS缓冲溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs标记β-淀粉样蛋白溶液，储存于4 ℃中备用；（4）分别用1.0 mm、0.3 mm、0.05 mm的氧化铝抛光粉对直径4 mm的玻碳电极做抛光处理，用超纯水冲洗干净；（5）将6 µL 0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL介孔硅MSN纳米材料水溶液滴涂至电极表面，室温下晾干；（6）将3 μL、0.5% ~ 1.5%戊二醛溶液滴于电极表面连接介孔硅MSN和抗体，用pH 7.5的PBS缓冲溶液冲洗电极表面，晾干；（7）将6 μL、8 μg/mL ~ 12 μg/mL的β-淀粉样蛋白抗体溶液孵化滴涂到电极表面，用pH7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干；（8）将2 μL ~ 4 μL体积分数为0.5%的牛血清白蛋白溶液滴涂到电极表面，以封闭电极表面上的非特异性活性位点，用pH 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干；（9）将6 μL、一定浓度的β-淀粉样蛋白溶液滴加到电极表面，用pH 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，4 ℃晾干；（10）将6 μL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs标记β-淀粉样蛋白溶液滴加到电极表面，4 ℃晾干，用pH 7.5的PBS缓冲溶液冲洗，制得一种基于Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs的竞争型电致化学发光免疫传感器。 2.如权利要求1所述制备方法制得的一种基于Ru(bpy)32+/Au@NiFe MOFs的竞争型电致化学发光免疫传感器用于β-淀粉样蛋白的检测，其特征在于，检测步骤如下：（1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器修饰的玻碳电极为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为500 V，循环伏安扫描电位范围为0 ~ 1.4 V，扫描速率为0.1 V/s；（2）在10 mL、pH 6.0 ~ 8.5的含浓度为1 mmol/L ~ 12 mmol/L三丙胺的PBS缓冲溶液中，通过电化学发光方法，检测对不同浓度的Aβ溶液产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；（3）将待测样品溶液代替β-淀粉样蛋白溶液进行测定。
所属类别：	发明专利