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原文传递一种检测万古霉素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

专利名称：	一种检测万古霉素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用
摘要：	本发明提供了一种检测万古霉素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，属于体外诊断试剂中药物浓度检测技术领域，所述试纸条包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、荧光微球垫、包被有万古霉素‑载体蛋白偶联物的硝酸纤维素膜和吸水垫，所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的万古霉素单克隆抗体；所述万古霉素单克隆抗体是以万古霉素‑牛血清白蛋白偶联物作为免疫原制备获得。本发明的试纸条与多种万古霉素类似物无交叉反应，具有检测准确度高、特异性强的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京丹大生物技术有限公司
发明人：	许秀丽;王艳新;常缘荣;周建平
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910020000.0
公开号：	CN109813693A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	刘奇
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100000 北京市通州区中关村科技园区通州园光机电一体化产业基地嘉创路5号1号楼301-303室
主权项：	1.一种万古霉素-牛血清白蛋白偶联物的制备方法，包括以下步骤: 1)将高碘酸钠水溶液与万古霉素水溶液混合，进行氧化还原反应，得到万古霉素预偶联物； 2)将牛血清白蛋白与碳酸盐缓冲液混合，得到牛血清白蛋白溶液； 3)将步骤1)所述万古霉素预偶联物与步骤2)所述牛血清白蛋白溶液混合，进行偶联反应，得到万古霉素-牛血清白蛋白偶联物；所述步骤1)和步骤2)没有时间顺序限制。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述偶联反应的时间为10～15h；所述偶联反应的温度为15～37℃。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述氧化还原反应的时间为0.8～1.5h；所述氧化还原反应的温度为18～26℃。 4.权利要求1～3任意一项所述制备方法制备得到的万古霉素-牛血清白蛋白偶联物。 5.一种检测万古霉素的时间分辨荧光免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品吸收垫、荧光微球垫、包被有万古霉素-载体蛋白偶联物的硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的万古霉素单克隆抗体；所述万古霉素单克隆抗体是以权利要求4所述的万古霉素-牛血清白蛋白偶联物作为免疫原制备获得。 6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为100～300nm；所述荧光微球表面含有羧基基团。 7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯包裹稀土离子Eu+的微球。 8.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记的万古霉素单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤: I将荧光微球悬液、MES缓冲液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺混合，进行活化处理，得到活化的荧光微球； II将步骤I所述活化的荧光微球和万古霉素单克隆抗体混合，进行偶联，得到荧光微球标记的万古霉素单克隆抗体。 9.权利要求5～8任意一项所述的试纸条在万古霉素检测中的应用，步骤如下: 将不同浓度的万古霉素纯品添加到不含万古霉素的人血清基质中制备校准品；所述校准品中万古霉素的浓度依次为40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL和0μg/mL；将所述校准品稀释100～1000倍后加样于试纸条的样品吸收垫，进行免疫层析，测定检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值(T/C比值)，获得校准品中浓度与T/C比值的函数关系；取待测样本，加样于试纸条的样品吸收垫，进行免疫层析，测定检测区时间分辨荧光强度与质控区时间分辨荧光强度的比值，根据上述获得得函数公式计算待测样品中万古霉素的含量。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述待测样本的加样量为1～100μL。
所属类别：	发明专利